Введение Калмыкии в систему государственного управления России: историко-правовые аспектытекст автореферата и тема диссертации по праву и юриспруденции 12.00.01 ВАК РФ

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ

по праву и юриспруденции на тему «Введение Калмыкии в систему государственного управления России: историко-правовые аспекты»

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

САМБУК Елена Викторовна

генетический контроль координированной регуляции метаболизма основных биогенных элементов

у дрожжей БАССНАЯОМУСЕБ CEREVISIAE Специальность 03. 00.15. - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Санкт-Петербург 2006

Работа выполнена в лаборатории биохимической генетики Биологического НИИ Санкт-Петербургского государственного университета и на кафедре генетики Санкт-Петербургского государственного университета

Научный консультант: академик РАН, профессор

Сергей Георгиевич Инге-Вечтомов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Тыну Рихович Сойдла

профессор, доктор биологических наук Андрей Петрович Перевозчиков

доктор биологических наук Владимир Иванович Евтушенко

Ведущее учреждение: ГНУ Всероссийский научно-

исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии

РАСХН

. с0 Защита диссертации состоится « ^^ » МуРЛ^Ъ^-_2006 г.

в ' " часов на заседании Диссертационного совета Д.212. 232. 12. по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7/9, Санкт-Петербургский государственный университет, биолого-почвенный факультет, кафедра генетики и селекции, аудитория 1.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке им.М.Горького Санкт-Петербургского государственного университета

Автореферат разослан ^ ОК-^Уг

2006 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Д. 212. 232. 12 кандидат биологических наук

, Мамон

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Изучение генетических механизмов, обеспечивающих координированную регуляцию метаболизма основных биогенных элементов, является фундаментальной проблемой биологии. Ее решение позволит подойти к пониманию принципов, лежащих: в основе самоорганизации живых систем и регуляции адаптивной нормы клетки.

Совокупность биохимических реакций в отдельной клетке и в многоклеточном организме обеспечивает постоянство внутренней среды -гомеостаз. Именно гомеостаз является одной из причин стабильности фенотипа. Его поддержание гарантируется генетическими и биохимическими механизмами, возникшими в ходе эволюции. Важную роль в поддержании гомеостаза играют системы регуляторных сетей, координирующих сигналы, поступающие из внешней среды, с ответом клетки, который выражается в дифференциальной активности генов, корректировке скорости биохимических реакций, высокой или замедленной скорости клеточных делений, развитии организма или его программированной гибели. Координированный ответ на внешние воздействия ведет к формированию адаптивных модификаций, реакции клеток и организма на изменения условий среды, которые неоднократно действовали на организм в ходе эволюции.

Проблема координированного ответа живых организмов на изменение характера питания издавна привлекает внимание исследователей. В 1840 году Ю. Либих открыл закон лимитирующего фактора: "Веществом, находящимся в минимуме, управляется урожай и определяется величина и устойчивость последнего во времени". Этот закон широко используется в экологических и агрохимических исследованиях, а в настоящее время особенно актуален в промышленной микробиологии ■— в связи с развитием производства гетерологичных белков' генетически модифицированными микроорганизмами. Согласно закону, если в среде не хватает нескольких компонентов, лимитирующим является только одно вещество, и лимитирующий фактор контролирует в данный момент практически все стороны жизнедеятельности организма. Сигнал о лимитирующем факторе должен быть воспринят всеми возможными мишенями, и метаболизм клетки соответствующим образом скорректирован. Важнейшую роль в передаче информации об изменении состава среды играют фосфопротеинкиназы и фосфатазы,'так как именно они* обеспечивают быстрый ответ клетки, не требующий синтеза белка de novo. Дополнительной возможностью для координированной экспрессии ключевых генов разных метаболических путей является вовлечение в их регуляцию различных транскрипционных факторов, что обеспечивает тонкую корректировку уровня транскрипции в зависимости от потребностей клетки. Механизмы, координирующие ответ на лимитирующий фактор, в настоящее время исследованы недостаточно.

Прекрасная генетическая изученность дрожжей Saccharomyces cerevisiae и доступность полной последовательности их генома предоставили уникальную возможность; развития системного подхода, позволяющего попять, как действие и взаимодействие генов в геноме обеспечивают ответ клетки на внешние факторы. В последние годы были разработаны методы направленного генерирования мутаций (Delneri el а!.; 2001) и созданы новые технологии, позволяющие анализировать уровень всех иРНК (транскриптом), всех белков (протеом) и низкомолекулярных

промежуточных соединений (метаболой) клетки дрожжей. Использование компьютерных программ для обработки различных баз данных позволяет понять структуру метаболических путей, рассчитать скорость потока метаболитов, а также получать графическое изображение генных и белковых взаимодействий (Stafford а. Stephanopoulos, 2001).

Углерод, азот, кислород и фосфор - важнейшие элементы, используемые клеткой для производства биологических молекул. Недостаток любого из этих компонентов ведет к накоплению клетками гликогена и трегалозы, нарушению морфологии клеток, переходу их в стадию Go, резкому снижению количества рибосом, споруляции (Ferea et ai, 1999; Konopka, 2000). Эти изменения можно рассматривать как адаптивную модификацию, реакцию на голод вообще, в основе которой лежит Дифференциальная активность генов. Регуляция общего ответа осуществляется при участии фосфопротеинкиназы A (Roosen et al., 2005). Наряду с общим ответом дрожжи формируют и специфический ответ, который определяется природой соответствующего компонента среды. Ведущую роль в этом случае играют специфические для каждого метаболического пути фосфопротеинкиназы -Snflp, Torl,2p, Pho85p (Rolland et al, 2002; ter Schurre/a/., 1998;Oshima, 1997).

Моделью, позволившей выявить генетические связи между различными метаболическими путями, послужила кислая фосфатаза (КФ) дрожжей. Неспецифические КФ (фосфомоноэстеразы) относятся к гидролитическим ферментам и расположены в периплазматическом пространстве клетки. КФ взаимодействуют с фосфоорганическими соединениями, расщепляют эфирную связь и высвобождают Ф„ (Boer a. Stein-Parve, 1970).

Идея использовать КФ в качестве модели для изучения механизмов регуляции у дрожжей S. cerevisiae была выдвинута на кафедре генетики и селекции Ленинградского университета в 70-е годы XX века. С тех пор эта модель чрезвычайно популярна во многих лабораториях . мира. В лаборатории биохимической генетики Биологического НИИ СПбГУ были изучены физико-химические свойства КФ (Падкина и др., 1974; Краснопевцева и др., 1979) и создана большая коллекция мутантов в регуляторных и структурных генах Р/Ю, что и послужило основой для выполнения данной работы (Смирнов и др., 1974; Тер-Аванесян и др.,1974; Кожин, Самсонова, 1975; Самсонова и др., 1975).

В нашей работе в качестве подходов использовали генетический анализ плейотропных эффектов мутаций в регуляторных генах, анализ генов-супрессоров мутаций pho85, цитологический и биохимический анализ последствий мутаций pho85, также проводили поиск новых мишеней регуляторных молекул системы ¡'НО.

Целью работы являлось исследование генетических механизмов, которые обеспечивают ответ различных метаболических путей на лимитирующий фактор и управляют формированием адаптивных модификаций.-'

В задачи исследования входило: выявление ключевых регуляторных факторов, способных функционировать в различных системах клетки и обеспечивать тонкую корректировку метаболизма и других процессов. Поскольку в работе в качестве основного инструмента использовали систему регуляции репрессибельных КФ, то претендентами на роль таких регуляторных белков явились циклин-зависимая фосфопротеинкиназа Pho85p и белок - активатор bHLH-типа - Pho4p.

Необходимым этапом работы явилась подробная характеристика фосфопротеинкиназы РЬо85р, так как к началу нашей работы ее функции были изучены недостаточно. В связи с этим было предпринято: ;

• проведение генетического анализа наследования плейотропных эффектов мутаций рИо85\

• изучение природы мутаций рИо85, имеющихся в коллекции;

• разработка подхода для поиска генов, кодирующих белки - шапероны фосфопротеинкиназы РЬо85р,

• исследование генетической, биохимической и цитологической природы нового плейотропного эффекта мутаций рИо85 - генетической нестабильности - ядерной и митохондриальной,

• изучение влияния мутаций рИо85 и рко4 на катаболизм и транспорт пролина,

• изучение влияния мутаций в гене РН085 и суперпродукции гена РН04 на процессы глюкозной катаболитной репрессии гена С/77,

• влияние мутаций рИо85 и рко4 на транскрипцию гена Н8Р82, кодирующего структуру белка-шапероиа,

• поиск и фенотипическая характеристика ортолога гена Р/Ю85 у дрожжей Р'юМарахюггч, широко используемых в биотехнологии.

Научная новизна исследования состоит в том, что экспериментально установлено, что сигнальная трансдукция является связующим звеном в координации метаболических процессов и формировании модификационных и наследственных изменений в клетке. Использование модели регуляции КФ дрожжей - сахаромицетов позволило впервые продемонстрировать важную роль циклин-зависимой фосфопротеинкиназы РЬо85р и активатора РЬо4р в координации экспрессии генов различных метаболических путей и осуществлении связи метаболизма фосфора, азота и углерода.

• Впервые показано, что белки РЬо85р и РЬо4р участвуют в глюкозной катаболитной репрессии гена С/Т/, кодирующего цитратсинтазу - первый фермент цикла Кребса.

• Впервые установлено влияние мутаций в генах РН085 и РН04 на катаболизм пролина, и, тем самым, продемонстрирована генетическая связь между метаболизмом фосфора и азота. Показано, что в катаболизме пролина белок РЬо4 играет роль негативного регулятора.

• Выявлен важный плейотропный эффект мутаций р1ю85 - повышенная генетическая нестабильность митохондриального и ядерного генома, что указывает на роль РЬо85р в системе поддержания оптимальной мутабильности клетки.

• Продемонстрировано влияние недостатка фосфора и мутаций в генах РНО на уровень экспрессии гена НБР82, кодирующего белок семейства Няр90. Известно, что эти белки играют важную роль в формировании буферной системы, канализирующей процессы развития у эукариот и нарушение их функций выявляет скрытые ресурсы изменчивости.

• Проведен анализ последовательности ДНК рко85 у мутантов коллекции, что позволило идентифицировать мутации, приводящие к нарушению фолдинга киназы и показать, что мутации в С-концевом домене имеют фенотипнческое проявление.

• При изучении спонтанных супрессоров мутаций рИо85-7 и рИо85-3 выявлены доминантные супрессоры, тесно сцепленные с геном РН085. Сходная локализация продемонстрирована для гена ЕСй/, кодирующего структуру белка -шаперона.

• Впервые идентифицирован ортолог гена РН085 у дрожжей Р1сЫа р(н1от и изучены плейотропные эффекты мутаций в этом гене.

• Предложена модель регуляции координированного ответа клетки на лимитирующий фактор и формирования адаптации в ответ на голодание.

Положения, выносимые на защиту .

1. Выбор клеткой стратегии ответа на лимитирующий фактор определяется конкуренцией между фосфопротеинкиназами, контролирующими метаболические пути. При этом общий ответ на голодание инициируется

. специфическим ответом.

2. Тонкая корректировка. экспрессии генов, кодирующих ферменты различных метаболических путей, осуществляется регуляторными белками системы, соответствующей лимитирующему фактору.

Теоретическое и практическое значение работы Работа вносит существенный вклад в понимание механизмов координированной регуляции метаболизма и выявляет важную роль фосфорилирования белков в этом процессе. Полученные данные убедительно демонстрируют наличие генетической инфраструктуры в регуляции адаптивной нормы клетки и позволяют предложить возможный механизм ее реализации. Работа открывает новые перспективы для дальнейших исследований в этой области.

Результаты работы использованы при составлении магистерской программы «Молекулярная и медицинская биотехнология» на биолого-почвенном факультете, в практикумах и лекционных курсах, а также при выполнении исследовательских работ студентами и аспирантами биолого-почвенного факультета. Штаммы РгсЫа рая1оп$, созданные в данной работе, использовали для получения продуцентов препаратов медицинского назначения.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на следующих отечественных и международных конференциях и симпозиумах: Всесоюзный симпозиум «Молекулярные механизмы генетических процессов» (Москва, 1990), Всесоюзный симпозиум «Структура и функции клеточного ядра» (Гродно, 1990), Всесоюзный симпозиум « Теоретические и прикладные аспекты молекулярной биологии» (Самарканд, 1991), Международный специализированный симпозиум по дрожжам (Рига, 1991), XVII международная конференция по генетике и'молекулярной биологии дрожжей (Лиссабон, 1995), Конференция американского генетического общества по генетике и молекулярной биологии дрожжей (Мэдисон, 1996), И Съезд ВОГ'иС (Санкт-Петербург, 2000), X международный Симпозиум по

дрожжам (Нидерланды, Арнем, 2000), конференция «Биотехнология-2000» (Пущино, 2000), XX международная конференция по генетике дрожжей и молекулярной биологии (Чехия, Прага, 2001), Международная научно-практическая школа-конференция «Цитокины. Воспаление. Иммунитст.»(Санкт-Петербург, 2002), Путинская школа-конференция молодых ученых «Биология-наука XXI века» (Пущино, 2003), 1, и, III Международный конгресс «Биотехнология - состояние и перспективы , развития» (Москва, 2002, Москва, 2003, Москва, 2005), XXII международная конференция по генетике дрожжей и молекулярной, биологии (Братислава, 2005).

Публикации.^ По материалам диссертации опубликовано 47 печатных работ в отечественных и зарубежных изданиях.'

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей материалы и " методы, результаты й их обсуждение, заключения, выводов и ' списка цитированной литературы, насчитывающего 503 источника. Работа изложена на 260 страницах машинописного текста, иллюстрирована 43 рисунками и 22 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. Генетический контроль метаболизма углерода, азота, фосфора у дрожжей БассИаготусеи сеге\'Ыае (Обзор литературы).

Обзор литературы посвящен результатам изучения генетического контроля метаболизма азота, углерода и фосфора у дрожжей. Наиболее подробно рассмотрены механизмы азотной катаболитной репрессии, глюкозной катаболитной репрессии, глюкозной индукции, а также регуляция транскрипции генов Р1Ю, контролирующих метаболизм фосфора у дрожжей. Особое внимание уделено роли фосфорилирования в ответе клетки на голодание.' Проведен сравнительным анализ функций фосфог/ротеинкиназ Тог1,2р, ЭпЛ р, РЬо85р, контролирующих метаболизм азота, углерода и фосфора, соответственно. В заключении сформулированы задачи работы.

Глава 2. Материалы и методы

Штаммы. В работе были использованы гаплоидные штаммы дрожжей Л'.. сеге\чяше лаборатории биохимической генетики БиНИИ СПбГУ, созданные на, основе штаммов Петергофской генетической коллекции и штаммов дрожжей, полученных из. других лабораторий. Генотипы и происхождение всех штаммов приводятся в работе. В работе был использован штамм Р\сЫа ра.ч!г>г1ч С81 15 (1пуйго§еп), а также штаммы ¡бактерий, традиционно используемые в молекулярно-генетических экспериментах.

Платиды. В качестве исходных/ при конструировании плазмид использовали стандартные плазмиды риС19, рКГЗб, рРЬЗХ, рЯ5425, рЯ5423, последовательность которых представлена в базе данных Стэнфордского университета (http://genome-www.stanford.edu). Плазмида С15А , любезно предоставлена д-ром М. Розенкраптцем и имеет в своем составе ген 1ШЛЗ дрожжей,

фрагмент 2мкм ДНК дрожжей и фрагмент бактериальной ДНК, несущий ген Атрг. Кроме этого плазмида содержит промотор гена С/77 (1097 п.о.), встроенный по сайтам Bglll и BamHI, и ген ß-галактозидазы, находящийся под контролем данного промотора (Rozenkrantz et al., 1994).

Для выращивания дрожжей использовали стандартные среды: минимальную и полную синтетическую среду, среду YEPD , среду для индукции споруляции, среды с этанолом и глицерином в качестве источника углерода. Среда с бромистым этидием была использована для получения штаммов [rhoO] (Захаров и др., 1984). Среда с пролином в качестве источника азота содержала пролин в конечной концентрации 0,005, 0, 23, 0, 46% (Lasko a. Brandriss, 1981). Минеральная среда, содержащая краситель метиленовый синий была использована для выявления мертвых клеток (Mitchell et а!., 1973).

Методы. В работе были использованы традиционные методы генетики дрожжей и некоторые биохимические, молекулярно - биологические и цитологические методики.

Стандартные генетические методики: индукция мутантов и ревертантов УФ, метод гибридизации, тест на аллелизм, тетрадный анализ, диадный анализ (Захаров, Мацелюх, 1986) и анализ расщепления в случайной выборке аскоспор приведены в литературе (Захаров и др., 1984).

Биохимические методики: качественное определение активности КФ проводили по методике, приведенной ранее (Падкина и др., 1974), определение активности ß - галактозидазы у дрожжей проводили по методике, предложенной ранее. Активность выражали в единицах Миллера (Миллер, 1976). Приготовление экстракта белков дрожжей S. cerevisiae осуществляли по методике (Bergman et al., 1987). Концентрацию белка определяли по методу Брадфорд (Bradford, 1981). Электрофоретическое разделение белков осуществляли в 8% ПААГ в присутствии ДДС натрия (Hübscher,!987). Гибридизацию белков с фрагментом промотора гена С/Г/, равномерно меченого Р'2 дезоксицитозинтрифосфатом, проводили по методике (Laemmli, 1970).

Цитологические методы: Визуализацию митохондриапьной ДНК осуществляли с помощью DAPI (Clark, 1980). Цитоскелет дрожжей окрашивали, используя фаллоидин, конъюгированный с флуорохромом родамином (Johnson, Nogueira, 1981). Препараты анализировали с помощью универсального флуоресцентного микроскопа DMRXA (Leica Wetzlar GmbH), оборудованного объективами FLUOTAR 40х/0.70 и х 100/1.30, тубусной оптикой с линзами от 1.0х до 1.6х, автоматической фотонасадкой, черно-белой CCD камерой накопления сигнала (Cohu) и набором комбинированных фильтров флуорохромов (DAP1 и йодистый пропидий). Для получения и обработки видеоизображения использовали программное обеспечение QFISH (Leica Cambridge Ltd.).

Молекулярно-биологические методы: В ходе выполнения работы были использованы стандартные методы — трансформация бактерий, выделение хромосомной и плазмидной ДНК из бактерий (Маниатис и др., 1984) и дрожжей (Fujimura, 1993), гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции, лигирование, электрофорез фрагментов ДНК в агарозном геле (Маниатис и др., 1984). Для конструирования плазмиды p85-WT ген Р1Ю85 амплифицировали с помощью ПЦР.

В качестве матрицы использовали препараты хромосомной ДНК штамма 1-GRF18. Секвенирование клонированных фрагментов проводили. с помощью набора для секвенирования "ALFexpress™ AutoCycle™ Sequencing Kit" (Pharmacia Biotech, Швеция) по прилагаемой инструкции.

Глава 3. Результаты и обсуждение

3.1. Структурно-функциональная характеристика киназы Pho85p и

генетический анализ плейотропных эффектов мутаций pho8S 1

Установление аллельности генов АСР82 и РН085. Первым этапом нашей работы явилось выявление мутантов, аллельных pho85, среди штаммов генетической коллекции лаборатории биохимической генетики. Наиболее вероятным претендентом являлся ген АСР82 (Самсонова и др., 1980). В нашей работе мы получили коллекцию мутантов аср82 на основе штамма 1-GRF18 (МАТа 1еи2 his3 pho3). Мутант c2I-I-GRF18 (МАТа Ieu2 his3 pho3 аср82) был использован в экспериментах по картированию гена АСР82. Предварительные эксперименты по индукции потерь хромосом у диплоидов, гетерозиготных по мутации аср82-21 и маркерам различных хромосом, при выращивании на среде с беномилом позволили предположить, что ген АСР82 может быть локализован в XVI хромосоме. Для уточнения локализации этого гена было изучено расщепление гибрида Д469 (с21-1-GRF18 х 4-Д466 МАТа Iys9-A21 his7-I radl-l phol-99). Оказалось, что гены АСР82 и RAD1 сцеплены (67P:2N:33T; %2 =178,31; Р Но <0,05). Расстояние между ними составляет 22,14 стрейнов или 22,06 сантиморганов. Ген RADI локализован в правом плече XVI хромосомы и сцеплен с центромером (Mortimer, a, Schieid, 1980). Для установления порядка расположения генов АСР82 и RADI относительно центромера был проведен анализ индуцированной УФ митотической рекомбинации диплоида 38Б-П2156 х 59-Д437 (RADI- АСР82 х radl-l аср82). Анализ частот митотической рекомбинации показал, что среди 53 гомозигот аср82/аср82 гомозиготы radl/radl (30) составили 56,6%, что позволило сделать вывод о том, что гены расположены в следующем порядке: центромер - RADI-ACP82 (Самбук и др., 1991). Ген РН085 картирован в правом плече XVI хромосомы. Фенотипическое проявление мутаций в генах РН085 и АСР82, а также их локализация позволили сделать вывод о том, что ген АСР82 соответствует гену РН085 саке-линий дрожжей.

Фенотипическая характеристика мутантов pho8S и pho80. Штаммы c3-, c7-, с21- 1-GRF18 (pho85-3, pho85-7, pho85-2I), а также штамм C10-1-GRF18 (pho80-W) были получены с помощью ЭМС. У мутантов оценивали активность КФ в условиях репрессии фосфатом и рост на средах, содержащих в качестве источника углерода этанол (глицерин), а также рост при 37°С. В качестве контроля приведен исходный штамм 1-GRF18 (табл.1).

Как видно, в отличие от исходного штамма и мутанта pho80-lfí, все мутанты pho85 плохо растут при 37°С (Ts), а сЗ- и с7- 1-GRF18, кроме того, не растут на среде с этанолом и глицерином в качестве источника углерода, что

.согласуется с результатами, полученными в отношении мутантов pho85 в других лабораториях. Следует отметить, что генетический анализ этих признаков для мутантовpho85 не проводили (Santos et al., 1995).

Таблица 1.

Фенотипическая характеристика мутантов pho85

Анализ молекулярной природы мутаций pho85. Для характеристики мутаций pho85 -3, -7, -21 проводили секвенирование ПЦР фрагментов ДНК гена РН085 этих штаммов, а также штамма 1-GRF18. Структуры циклин-зависимых протеинкиназ характеризуются высокой степенью гомологии. Мы проанализировали .возможное влияние аминокислотных замен у мутантов pho85 на структуру белка, основываясь на результатах кристаллографического анализа Cdk2 человека (hltp://\vwvv/sdscieclu/Kinases/pk home.html) (рис. 1).

Pho85p

N _ С

|~1 1ПИППУ1У IVIAIVIBIVIIIVIIIHXI X IX) I

C3-1-GRF18'¿Уу* Д ДК28ЭЕ

F82L

C7-1GRF18 C21-1-GRF18

I6SS

R132H

K263E.R285G Q207R

Рис. 1. Локализация замен аминокислот в белке Pho85p у мутантов c3-, c7-, c2l -1-GRPI8

Аллель pho85'3 штамма C3-1-GRF18 содержит 3 мутации: A1I5G (в интроне), A967G и A969G, но только одна из них, A967G, приводит к замене Lys289Glu в С-концевой части молекулы Pho85p (XI субдомен). У мутанта сЗ -1-GRF18 замена'в этой области белка Pho85p приводит к конститутивному синтезу КФ, к отсутствию роста на среде с этанолом и при 37°С, то есть эта часть молекулы функциональна значима.

Аллель pho85-7 штамма C7-1-GRF18 содержит мутации: Т346С, A889G, A955G, приводящие к появлению нескольких замен Phe82Leu, Lys263GIu, Arg285Gly n Pho85p. Известно, что аминокислоты 82-86 участвуют в связывании малой и большой долей молекулы киназы, 'поэтому такая замена можетприводить к

нарушению ее третичной структуры. Замены Lys263Glu и Arg285Gly расположены в XI домене молекулы Pho85p.

Аллель pho85-21 штамма C2I-1-GRF18 содержит мутации T296G, G497A, A752G, приводящие к заменам IIe65Ser, Argl32His, GIn217Arg. Замена Ile65Ser возникла в IV домене. У Pho85p эта часть молекулы, по-видимому, является, а-спиралью, и замена Не на Ser не нарушает ее структуру. Замена Argl32His возникла в VI b субдомене. Этот домен формирует каталитическую петлю молекулы, которая содержит консенсус-мотив HRDLKxxN. Остаток Argl32 является консервативным у всех киназ и участвует в правильном расположении молекулы АТФ в щели между большой и малой долями киназы. Известно, что такая замена снижает взаимодействие Pho85p с Pho80p (Wickert et al., 1998). Замена GIn217Arg возникла в X субдомене, функция.его не известна. Таким образом, штаммы c3-, c7-, с21-1-GRF18 несут множественные миссенс-мутации, при этом последовательность ДНК PHOS5 штамма I-GRF18 не отличается от последовательности гена РН085, известной в литературе (Uesono et al., 1987). Причина возникновения нескольких мутаций в гене РН085 не ясна, возможно - это результат первичного мутагенеза, либо накопления вторичных мутаций в процессе культивирования.

Генетический анализ плейотроппых эффектов. Как было отмечено выше, отсутствие роста7 на среде с этанолом и чувствительность к высокой температуре, считали плейотропными эффектами мутаций pho85. Мы провели гибридологический анализ этих признаков. Штаммы сЗ-^ c7-, C21-I-GRF18 скрестили со штаммом 43-Д553 (МАТа игаЗ adel-14pho3-I). У диплоидов определяли рост на среде с этанолом (или глицерином), а также и при 37°С. Диплоиды росли, что свидетельствует о рецессивности анализируемых признаков. Диплоиды, гетерозиготные по мутации pho85, плохо спорулируют и обладают низкой фертильностью (Самбук и др., 1991), поэтому в работе анализировали расщепление гибридов в случайной выборке аскоспор. Проведенный нами анализ признака «чувствительность к высокой температуре» показал, что он является следствием мутации в ядерном гене, наследуется моногенно, независимо от pho85. Генетический анализ признака Eth' продемонстрировал, что его наследование имеет неядерный характер, и, возможно, связано с нарушением функции митохондрий у мутантов c3-I-GRF18, C7-I-GRF18. Неядерное наследование признака Eth- у мутантов pho85 было подтверждено скрещиванием со штаммом [rho°] 43-Д553. Полученные диплоиды не росли на среде с этанолом. При трансформации мутантов pho85 плазмидой pRS423-P//0<M, несущей ген Р1Ю85 происходило восстановление регуляции гена РИ05, но не роста на среде со спиртом и при 37°С.

Генетическая нестабильность ядерного и митохондриального геномов -новый плейотропный эффект мутаций pho85. Для выяснения того, зависит ли появление клонов [rho'J и Ts. от наличия мутации pho85, штамм I-GRF18 трансформировали линейным Pvull - фрагментом, плазм иды pDEiL85-/./!7J2 и отбирали клоны, выросшие на среде без лейцина у которых определяли активность КФ на среде с фосфатом. Штаммы с дизрупцией гена РП085 синтезируют КФ

конститутивно. Для доказательства интеграции проводили ПЦР, используя праймеры к гену РН085.

Трансформантов выращивали на среде с глюкозой в качестве источника углерода, что предполагает отсутствие селективного преимущества у [rho+] в сравнении с [rho"]. В результате были получены клоны двух типов - мелкие - Leu+ Pho* возникшие за счет интеграции в ген PH08S, и крупные - Leu+ Pho", возникшие за счет рекомбинации плазмидной и хромосомной копий гена LEU2. Были выбраны по 7 мелких и 7 крупных трансформантов. Колонии трансформантов, взятые непосредственно с селективной среды, суспендировали в воде и высевали на среду ПЕПФО из расчета 100-120 колоний на чашку. Затем в рассеве каждого трансформанта отсевали по 40 субклонов и анализировали их рост на среде с этанолом, чувствительность к высокой температуре, активность КФ и рост на среде без лейцина. Оказалось, что все субклоны Pho* растут без лейцина, при этом часть клонов является Ts, а часть - Тг. Следовательно, в процессе митотических делений в клетках генотипа pho85;:LEU2 возникают мутации ts, а также появляются клоны Eth". Диплоиды, полученные при скрещивании возникших мутантов Eth* с тестерами [rhoO] не росли на среде со спиртом, что свидетельствует о цитоплазматической природе наследования этого признака. Следует отметить, что при анализе трансформантов Pho'Leu1, гетерогенности в отношении признаков Ts и Eth" не было. Таким образом, отсутствие киназы Pho85p приводит к накоплению спонтанных ts и [rho"] мутаций в процессе митотических делений.

Для определения количества генов, в которых возникают мутации ts был проведен функциональный тест на аллелизм. В результате мутации распределились, как минимум, потрем группам комплементации.

В процессе работы выяснилось, что генетическая нестабильность штаммов 1-GRF18, ЗБ-П4405, 1Г-П4405 с дизрупцией гена Р1Ю85 выражалась также в накоплении колоний вторичного роста Pho" после длительной (около 2-х недель) инкубации на среде с фосфатом. Анализ более 100 ревертантов Pho+—»Pho" у разных штаммов показал, что мутации рецессивны и аллельны pho4.

Факт накопления спонтанных мутаций Is и pho4 на фоне отсутствия функциональной Pho85p позволил предположить, что киназа может играть важную роль в поддержании стабильности ядерного генома дрожжей и связывать метаболическое состояние клетки с уровнем спонтанной мутабильности.

Влияние дизрупции гена PHOSS на распределение митохондриальных нунлеоидов между материнской клеткой и почкой. При изучении природы возникновения признака [rho"] использовали штаммы разного происхождения (YM954, 1-GRF18, 1Г-П4405, BWG!-7a) для того, чтобы исключить влияние генетического фона. В результате трансформации штаммов фрагментами плазмид pDEL85::LEU2 или pDEL85::URA3 были получены трансформанты pho85::LEU2 и pho85::UHA3, синтезирующие КФ конститутивно - Pho+.

Выросшие клоны рассевали на среде с глюкозой в качестве источника углерода из расчета 100-120 колоний на чашку, а затем перепечатывали на среду с этанолом. Среди выросших колоний встречались [rho'] и [rho*]. Клоны [rho] в дальнейшем в процессе митотических делений сохраняли этот признак, тогда как

клоны [rho+] при последующих пересевах постепенно накапливали клоны [rho"]. Частота появления клонов [rho"] у разных штаммов составляла от 15 до 90%. Следует отметить, что у исходных штаммов в этих условиях клоны [rho"] не были обнаружены.

Накопление [rho"] клонов на фоне дизрупции phoS5::LEU2 или pfio85::URA3 может быть вызвано либо мутациями в митДНК [rho"], либо нарушением распределения нуклеоидов - комплексов митДНК с белками - между материнской клеткой и почкой. Обычно гаплоидные клетки дрожжей с функциональными митохондриями содержат 10-20 нуклеоидов на клетку (Williamson a, Fennell,1979).

Используя цитологические методики (окраску DAPI) удалось показать, что возникающие на фоне дизрупции клоны с дыхательной некомпетентностью не содержат митДНК, то есть являются истинными [rho0].

Известно, что распределение митохондрий между материнской клеткой и почкой в процессе митотических делений связано с цитоскелетом. У дрожжей обнаружены три структуры цитоскелета - кортикальные актиновые "заплаты", актиновые тяжи и сократительное актомиозиновое кольцо (Boldogh et al., 2001).

Для изучения влияния Pho85p на структуру цитоскелета выбрали штамм YM954 (MAT а ura3-52 his3-200 ade2-I01 fys2-80J Ieu2-3JI2 trpl-901) и его производный 85-YM954 (pho85::VRA3). Клетки обрабатывали родамин-фаллоидином и DAP1. Оказалось, что у штамма с дизрупцией гена РН085 увеличивается число актиновых "заплат" по сравнению с исходным штаммом YM954, что указывает на нарушение структуры цитоскелета. В пользу этого свидетельствуют данные, представленные в нашей работе, об изменении спектра термостабильных белков, выделяемых совместно с тропомиозином у штамма с дизрупцией гена РН085.Ташм образом, отсутствие киназы Pho85p может приводить к аномалиям распределения митохондрий, следовательно и нуклеоидов, и появлению почек без митДНК.

В заключительной части этого раздела обсуждается возможная роль фосфопротеинкиназы Pho85p в регуляции молекулярных процессов, поддерживающих уровень оптимальной мутабильности эукариот.

Поиск белков-шаперонов комплекса Pho8Sp-Pho80p. Штаммы сЗ- и с7-1-GRF18 нестабильны в отношении признака Pho+ и в процессе культивирования накапливают ревертанты Pho". Мутации, возникшие в гене PHOS5 у штаммов сЗ- и c7-l-GRF18, изменяют конформацию молекулы. Это предоставило нам возможность поиска генов, кодирующих белки-шапероны киназы Pho85p. В настоящее время шапероны этой киназы не идентифицированы.

Так как мутации в гене РН085 у сЗ- и C7-1-GRF18 являются миссенс-мутациями, то ревертирование может происходить за счет истинно обратных мутаций, омнипотентной трансляционной супрессии, а также мутаций в генах, кодирующих структуру циклинов и белков-шаперонов Pho85p. Особенно интересен мутант C7-1-GRF18, так как у молекулы Pho85p этого штамма предположительно нарушена не только С-концевая часть молекулы, как у C3-1-GRF18, но и правильное взаимодействие двух долей киназы (Самбук и др., 2002).

( Спонтанные ревертанты Pho+ —> Pho" у штаммов сЗ- и C7-1-GRF18 были отобраны в независимых экспериментах. Анализ доминантности супрессорных мутаций, возникающих на фоне pho85-3 , pho85-7, показал, что все супрессорные мутации доминантны. Для доказательства того, что ревертанты возникли не за счет истинно обратных мутаций, анализировали сцепление доминантных мутаций, условно обозначенных как DSP (Dominant Suppressors of pho85) с мутациями phoSS. Гибридологический анализ, подробно представленный в работе, позволил выявить супрессорные мутации, сцепленные с Р1Ю85. Результаты тетрадного анализа одного из них (DSPI) представлены в таблице 2. • >

. Таблица 2.

Тетрадный анализ гибрида Д554 (R3-c3-l -GRF18 * 99-1Г-П188) MA Та leu2pho3his3pho85-3 DSPI х MA Та pho3 his 7/ys9lysX

Пары маркеров Типы тетрад Р N Т Х2 (1:1:4) Я

HIS7:HIS3 6 6 28 0,2 >0,05

LEU2 :МАТ ■ 26 1 13 114,8 <0,05

LYS9:LYSX 11 12 17 10,51 <0,05

РН085:DSP1 69 0 3 324,93 <0,05

Как следует из таблицы 2, для пары маркеров МАТ и LEU2 наблюдали отклонение от соотношения 1P:1N:4T, т.к. данные маркеры находятся в одной хромосоме и сцеплены. Для маркеров LYS9 - LYSX наблюдали соотношение, отличающееся от 1P:1N:4T, т.к. гены сцеплены с центромерами своих хромосом (для этой гипотезы %2 ==10,51 и,. следовательно, Р<0,05). Результаты расщепления по потребности в гистидине и лизине свидетельствуют об отсутствии влияния супрессорной мутации на наследование охр-мутаций. Таким образом, ген DSPI не является омнипотентным трансляционным супрессором. Результаты расщепления по признаку Pho" : Pho* позволили определить расстояние между генами DSPI и РН085. Расстояние оценивали по формуле D А-в - 100 (0,5f T+3f N) (сМ) (Захаров и др., 1984), оно оказалось равным 2,1сМ. Ген DSPI находится в левом плече XVI хромосомы на расстоянии 2,1 сМ от гена РГЮ85 (Самбук и др., 2003).

В "работе анализировали собственные фенотипические проявления супрессорных мутаций, а также проводили рекомбинационный тест, который выявил, по крайней мере, 5 генов DSP1-DSPS.

Наиболее Информативным, является обнаружение гена-супрессора DSPI, сцепленного с РН085. Анализ генетической карты XVI хромосомы и функций генов, сцепленных с Р1Ю85, выявил ген EGDI, который расположен на расстоянии 2 сМ от

Р1Ю85. В гене EGDi возникают доминантные мутации, не имеющие собственного фенотипического проявления. Впервые Egdlp был идентифицирован как энхансер ДНК-связывающей активности активатора Gal4p. Предполагается, что Существует целое семейство Egdl-подобных шаперонов, функции которых в настоящее время не изучены (Parthun et ah, 1992). Возможно, что некоторые из идентифицированных в работе доминантных мутаций возникли в генах этого семейства.

Полученные результаты позволяют предположить, что анализ аллелоспецифических взаимодействий может быть эффективным подходом к выявлению белков - шаперонов киназы Pho85p.

3.2. Поиск регуляторных путей, связывающих метаболизм азота и фосфора у дрожжей S. cerevisiae

Несмотря на то, что зависимость многих реакций метаболизма азота от уровня фосфата очевидна, связь между метаболизмом азота и фосфора на генетическом уровне к началу наших исследований не была установлена. В настоящей работе анализировали влияние мутаций в генах РНО на способность дрожжей усваивать различные соединения азота.

Рост мутантов pho на средах с различными источниками азота. Для выяснения того, влияют ли мутации в регуляторных генах РНО па. утилизацию соединений азота, коллекцию мутантов высевали на минеральные среды, содержащие пролин (0,005%), мочевину или сульфат аммония в качестве источников азота. Источники углерода и неорганического фосфата не лимитированы. Оказалось, что качество источника азота не влияет на рост исходных штаммов GRF18, 1Г-П188 и мутантов pho3, pho5, pho4, pho80, phoSl. В то же, время все мутанты pho85, ne растут на среде с пролином в качестве единственного источника азота (Pro"). Пролин и мочевина являются «бедными» источниками азота, однако на среде с мочевиной рост штаммов сЗ-, с7-, с8-, C21-1-GRF18 не отличается от роста штамма GRF18. Следовательно, мутации pho85 оказывают специфический эффект либо на транспорт либо на катаболизм пролина.

Для того, чтобы доказать, что неспособность расти па среде с пролином является плейотропным эффектом мутаций pho85 был проведен анализ гибрида D121 (C21-1-GRF18 * 99-1Г-П188), гомозиготного по мутации рИоЗ и гетерозиготного по мутации pho85-2l. Так как мутация pho85-2I снижает эффективность споруляции, анализировали расщепление в случайной выборке аскоспор. Было показано, что все 68 сегрегантов Pho+ (pho85) не растут на среде с пролином п качестве источника азота. Расщепление по остальным маркерам не отличалось от теоретически ожидаемых соотношений.

Таким образом, отсутствие роста на среде с пролином в качестве единственного источника азота является плейотропным эффектом мутаций pho85.

Мутации pho8S влияют на транспорт пролина. Пролин поступает в клетку дрожжей S. cerevisiae с помощью двух пермеаз. Первая, Put4p, обладает высоким сродством к пролину и функционирует только при низкой его концентрации в среде (0,005%), вторая, Gaplp, обладает низким сродством к пролину, широкой

субстратной специфичностью и работает при высоких концентрациях пролина. Гистидин инг^бирует. активность Сар1р (ЬаБко а. Вгапс1пБЗ, 1981). Для выяснения того, влияют ли мутации рЪо85 на транспорт пролина, осуществляемый пермеазами Р1П4р. или Сар1р, использовали среды с различными концентрациями пролина и среды, содержащие пролин и гистидин (табл. 3).

Таблица 3.

Рост мутантов рИо85 на средах, содержащих пролин в различных , , ■ концентрациях в качестве источника азота и гистидин

Штамм Рост на среде с пролином

без гистидина с гистидином

0,005% 0,23% 0,46% 0,23% 0,46%

1-GRF18 + + + - -

C3-1-GRFI8 - . + - - -

C7-I-GRF18 - - -

C21-1-GRF18 - +/- - - -

Примечание: "+ рост штаммов;"+■/-" - ослабленный рост; " -"- отсутствие роста

Штамм 1-GRF18 растет на среде с низкой концентрацией пролина (0,005%), тогда как мутанты pho85 не могут использовать пролин, следовательно, мутации либо блокируют транспорт пролина, осуществляемый пермеазой Put4p, либо влияют на индукцию ферментов катаболизма пролина — пролиноксидазы и Д-пирролин-5-карбоксилатдегидрогеназы (Р5С-дегидрогеназы). На среде с промежуточной концентрацией пролина (0,23%) штаммы, несущие мутации в гене РН085, подрастают, что свидетельствует о наличии определенного уровня ферментов утилизации пролина, его транспорт в этих условиях осуществляется Gaplp. На среде с пролином в концентрации 0,23% и гистидином ингибирована активность пермеазы Gaplp, пролин совсем не поступает в клетки штамма 1-GRF18 и мутантов pho85, поэтому нет роста штаммов независимо от их генотипа. На среде с высоким содержанием пролина (0,46%) активность Gaplp пермеазы не ингибирована, штамм 1-GRP18 растет, но мутанты pho85 не растут.

При культивировании мутантов агеД у Aspergillus nidulans со сниженным уровнем ферментов деградации пролина было показано, что высокая внутриклеточная концентрация пролина токсична (Arst et al1980). В нашей работе токсичность пролина для клеток дрожжей определяли, используя среды, содержащие пролин в концентрации 0, 005% и 0, 46% и метиленовый синий. После трех суток инкубирования клетки штаммов 1- GRF18 (РН085 pho3) и сЗ-, с7-, с21-1- GRF18 (pho85 pho3) анализировали под микроскопом. Оказалось, что клетки штамма 1-GRF18 не окрашены на всех типах сред, тогда как у мутантов pho85 большая часть клеток образует почку синего цвета на среде с 0,46% пролина. Таким образом, данная концентрация пролина является токсичной для мутантов pho85, что

свидетельствует о накоплении токсичного промежуточного продукта и, возможно, о сниженном уровне ферментов деградации пролина. „ ,.,

• \ ;

Влияние мутаций рИо4 на рост рко85 мутантов на среде с пролином. Мутации в гене РИ04, кодирующем активатор транскрипции, приводят к отсутствию активности КФ у штаммов генотипа рИо85рИо4. В то же время эти штаммы растут на среде с пролином в концентрации 0,005% и 0,46% . Кривые роста штаммов в среде с пролином в концентрации 0,005% представлены на рис. 2. Аналогичные кривые роста штаммов р2- и р4 - с21-1-С1?Р18 (рИо85 рко4) были получены в среде с пролином в концентрации 0,46%. Как видно, в отличие от штамма с21-1-ОКТ18 [рИо85), штаммы р2- и р4 - с21-1-ОЯР18 {р1ю85 рИо4) растут на среде с пролином, хотя слабее, чем штамм 1 -GR.fi 8 (РН04 РН085).

ООм-о 1.6 1.2 0.« Рисунок 2. Кривые роста штаммов 1-ОГ<Р18 {¡ЛоЗ РИ085 РИ04) - (■), • • р2-с2Ы-0!ЧП8 (рНоЗ р(ю85рЬо !)-■/■ . р4- с21 -1 -СИР 18 {рЪоЗ / рИо85рЬо4) - (Д), с21-1-ОКР18 (рНоЗ . ^ р!'0^^) - ( * ) на среде с пролином в ; / концентрации 0,005%.

а 16 24 32 40 43 5« 64 1* ев ва ев Время (час]

Как показывают наши результаты, мутация pho4 восстанавливает рост штаммов генотипа pho85 либо за счет восстановления транспорта пролина, осуществляемого пермеазой Put4p, либо за счет регуляции уровня экспрессии генов-PUT1 или PUT2, Транскрипционный активатор Pho4p вовлечен в регуляцию утилизации пролина, но в этой системе он, видимо, функционирует как репрессор. Анализ промоторов генов PUT1, PUT2 выявил потенциальные сайты связывания для белка Pho4p (Е-бокс). В промоторе гена PUTI обнаружено 4 сайта, в промоторе гена PUT2 - также 4 сайта. То есть, существует возможность того, что Pho4p может связываться с промоторами и влиять на уровень транскрипции генов PUT1 и PUT2.

Таким образом, нам удалось выявить на генетическом уровне связь между регуляторами метаболизма фосфора и катаболизмом пролина (Попова и др., 2000). Подтверждение наших предположений было получено при анализе транскриптома дрожжей. Оказалось, что экспрессия генов PUT1 и PUT2 зависит от концентрации фосфата в среде и мутаций в регуляторных генах ¡'НО. Интересно, что регуляция этих генов осуществляется по-разному. Ген PUT/ активируется, a PUT2 репрессируется на среде с низким уровнем фосфата и у мутантов РН04~ , что может являться причиной накопления токсичных соединений (Ogawa el а!., 2000).

3.3. Поиск регуляторных путей, связывающих метаболизм углерода и фосфора у дрожжей 5. сегегЫае

Регуляторные механизмы, связывающие и координирующие метаболизм углерода и фосфора, к началу нашей работы не были исследованы. Мы изучали влияние неорганического фосфата и белков-регуляторов системы РНО на глкжозную катаболитную репрессию и использовали для этого ген С/77, кодирующий первый фермент цикла Кребса.

Экспрессия гена С1Т1 зависит от концентрации фосфата и дизрупции гена РН085. В качестве исходного использовали штамм В\УС1-7а, который трансформировали плазмидой С15А, несущей в своем составе ген /асИ под контролем промотора С/7"/, что позволило оценивать уровень экспрессии гена измеряя активность Р-галактозидазы. Для изучения зависимости уровня глюкозной репрессии гена С/77 от концентрации неорганического фосфата использовали среды с глюкозой, с высоким и низким содержанием фосфата (рис. 3).

Как видно, отсутствие Ф„ в среде ослабляет глюкозную репрессию гена С/77 приблизительно в два раза. Таким образом, можно предположить, что существует некий белок, регулирующий уровень экспрессии С/77 на среде с глюкозой в зависимости от концентрации фосфата. Экспрессия генов, транскрипционная активность которых повышается при недостатке фосфата, регулируется РЬо85р и ее субстратом белком-активатором Р1ю4 (ОвЫта, 1997). Поэтому в настоящей работе изучали влияние отсутствия РЬо85р на глюкозную репрессию С/Т/.

Штамм ЯЗ-ВМЧШ^а с дизрупцией гена Р1Ю85 был получен в результате интеграции фрагмента РуиП плазм иды рОЕ \^85::СЕС/2 в ген РН085 в XVI хромосому.

30 00

г

1 25.00

! 15.00

_| Высокая концентрация фосфата

Низкая концентрация фосфата

| «.во

I

5.00

0.00 1

4.

.]..... и.

II

Ж &

ч

Рис. 3. Удельная активность р-

галактозвдазы у штаммов В\УС1-7а, [гЬоО] BWGl-7a и 85-ВШ01-7а на минимальной среде с высоким и низким содержанием фосфата. Результаты получены в трех независимых

экспериментах. 1 - В\УС1-7а; 2 -[гИоО] В\¥С1-7а; 3 -85-В\У01-7а (рИо85::1*Еи2)

Штамм

Факт интеграции подтверждали ПЦР с использованием праймеров к гену Р1Ю85. Дополнительным критерием является наличие активности КФ на среде МФО у клонов дизруптанта.

Мутанты pho8S, как правило, не растут на среде с этанолом и являются [rhoO] {Самбук и др., 2003). Для того, чтобы выявить влияние мутации pho85 на катаболиткую репрессию гена С1Т1, необходимо сравнить уровень активности ß-галактозидазы у дизруптанта pho85::LEU2 и штамма BWGI-7a [rhoO). Штамм BWGl-7a [rhoO] был получен в результате нескольких пассажей исходного штамма на среде с бромистым этидием. Штаммы с дизрупцией pho8S::LEU2 и [rhoO] BWGi-7а трансформировали плазмидой С15А. У полученных трансформантов определяли активность ß-гапактозидазы. Как видно (рис. 3), отсутствие Pho85p приводит к повышению уровня экспрессии гена С/Т/ независимо от концентрации фосфата. Подобного эффекта не наблюдали в случае [rhoO] BWGl-7a.

Таким образом, ослабление глюкозной репрессии гена С/Т/ на среде с глюкозой связано с отсутствием киназы Pho85p.

Поиск белков, взаимодействующих с областью промотора гена С1Г/, ответственной за глюкозную репрессию. Возможным претендентом пароль белка, регулирующего уровень транскрипции С/Т/ на среде с глюкозой, является Pho4p, субстрат протеинкиназы Pho85p. Для того, чтобы идентифицировать белки, связывающиеся с фрагментом промотора С/Т/ (от -367 до -348), отвечающим за глюкозную репрессию, штамм BWGl-7a выращивали на среде с глюкозой й низким содержанием фосфата. Клетки разрушали и проводили дробное Осаждение белков сульфатом аммония. В предварительных экспериментах по изучению электрофоретической подвижности ДНК-белковых комплексов было показано, что с анализируемой областью промотора СП/ способны связываться белки фракции, получающейся при 60% насыщении сульфатом аммония. В качестве контроля использовали промотор гена Р//05. Как видно, в данной фракции присутствуют белки, способные связываться с промотором Р/Ю5 (рис.4).

1 .2 3 4 Рис.4. Электрофорсграмма ДНК-белковых комплексов.

1- Фракция белков штамма BWGJ-7а, полученных при 60%

т насыщении сульфатом аммония, взаимодсйстзующая с

промотором гена С/Г/(-367-348).

| 2- Фрагмент промотора гена CIT1 (-367-348).

Ш^Р,- 3- Фрагмент Bamlll-SalGl промотора PHOS (600 и.о.).

■'V'i^-Ii содержащий сайты связывания для Pho4p и Pho2p.

4- Фракция белков штамма ВWG1-7а, полученных при .60%

насыщении сульфатом аммония, взаимодействующая с

промотором гена PHOS.

Именно эти белки в дальнейшем разделяли в ПААГ в присутствии ДДС натрия, переносили на нитроцеллюлозную мембрану и гибридизовали с фрагментом

промотора С/Т/ (от -367 до -348). Результаты ДНК-белковой гибридизации приведены на рис.5. .

в Рис.5. ДНК-белковая гибридизация фрагмента промотора гена С1Т1 (-367-348) с фракцией белков штамма В№'Ы-7а, полученных при 60% насыщении сульфатом аммония.

1 - Маркеры молекулярной массы белков (миозин -205,0 кДа, галактозидаза - 116,0 кДа, фосфорилаза В -97,2 кДа, альбумин - 66,0 кДа, овальбумин - 45,0 кДа, кислая ангцдраза - 31,0 кДа, ингибитор трипсина 21,5 кДа.

2 - Белки штамма В\УС1-7а, полученные при 60% насыщении сульфатом аммония и разделенные в ПААГ в присутствии ДЦС натрия

Как видно, на рентгенограмме присутствует только одна белковая полоса, взаимодействующая с данным фрагментом промотора. Молекулярная масса данного белка соответствует ~ 34 кДа.

Для гибридизации была выбрана последовательность промотора, которая ответственна за глюкозную катаболитную репрессию и содержит перекрывающиеся последовательности". Е-бокс и последовательность для белков Rtg 1, 2, 3. Учитывая, что молекулярная масса Rtglp-18,9, Rtg2p-65,4, Rtg3p-54,1, Pho4p-33,9 кДа, можно сделать вывод о том, что, возможно, именно Pho4p связывается с фрагментом промотора CIT1.

Таким образом, нам впервые удалось продемонстрировать коррекцию экспрессии генов, регулируемых глюкозной катаболитной репрессией при недостатке фосфата регуляторами системы РНО. Полученные в последнее время данные о нежизнеспособности штаммов с делециями в генах gcr/pho85 и gcr2pho85 (Huang et al.. 2002), а также факт, что Pho85p вовлечен в регуляцию гена UGP/, кодирующего УДФ-глюкозо-пирофосфорилазу (Nishizawa et al., 2001), подтверждают наши данные о существовании генетических механизмов, координирующих метаболизм фосфора и углерода у дрожжей.

3.4. Экспрессия гена HSP82, кодирующего структуру белкя-шаперона, зависит от концентрации фосфата в среде и мутаций в генах РНО

Шапероны семейства Hsp90p являются одним из основных факторов внутриклеточной адаптации к неблагоприятным воздействиям, которые определяют выживаемость клеток. Зависит ли уровень этого шаперона от голодания и является ли он частью общей системы, обеспечивающей стабильность фенотипа в этих условиях? Для того,'^тобы ответить на этот вопрос, мы изучали зависимость

экспрессии гена HSP82 от концентрации фосфата в среде. Для этого был выбран штамм CSG55(M47a smol-l cyh2 HSP82-lacZ:: LEV2 ura3-52 leu2-ll,U2 ыгаЗ-52 pho3), содержащий конструкцию, содержащую промотор гена HSP82 и ген lacZ Е. coli, интегрированную в хромосому XVI. Оказалось, что на среде без фосфата уровень экспрессии гена повышается примерно в 4 раза. Этот факт побудил нас исследовать, не является ли ген HSP82 элементом регулона РИО. С этой целью в работе на основе штамма CSG55 была создана коллекция мутантов pho3, pho3pho8G, pho3pho85, pho3pho85pho4, проведен генетический анализ наследования этих мутаций, изучено. влияние уровня фосфата в среде и мутаций в генах РИО на уровень транскрипции HSP82 (Самбук и др., 2002). Результаты представлены на рис. 6.

CSGS5 3-CSG5S 80-3-CSG5S 85-3-CSC55 1- и 2-85-3-CSG55 - РНОЗРНОЗ р/юЗ ptio3plKtB0 pha3 phaSS pho3 phoBS plto4

Рис. 6. Активность ß-галакточидачы у штаммов разного генотипа, производных CSG55 на средах ПЕП и ГШПФО

Как видно, недостаток фосфата в среде ПЕП ведет к 4-кратному увеличению активности р-галактозидазы по сравнению с активностью в среде ПЕПФО у штамма CSG55. Отсутствие фосфата активирует базальный ■ уровень транскрипции IISP82 координировано с экспрессией Р1Ю5. При этом мутация в гене PUOSO не влияет на уровень экспрессии гена HSP82, мутация pho85 приводит к конститутивной экспрессии USP82, а дополнительная мутация pho4, полученная на фоне pho85, . блокирует конститутивный синтез. Таким образом, Pho4p необходим для активации транскрипции гена IISP82 в условиях голодания по фосфату, a Pho85p подавляет его экспрессию, когда фосфата в среде достаточно. Следует отметить, что в промоторе гена Í/SP82, идентифицирован сайт связывания для белка Р1ю4р - E-бокс (CATCTG).

Hsp90p является избыточным молекулярным шапероном и обнаружен в эубактериях и у всех видов эукариот (Borkowich el al., 1989). Он играет центральную

роль в клеточном сигналинге, так как необходим для поддержания активности ключевых сигнальных молекул - рецепторов стероидных гормонов и протеинкиназ (Bohen a. Yamamoto, 1993). Таким образом, мы показали, что ген HSP82 при недостатке фосфата в среде регулируется координировано с генами регулона РНО при участии белков Pho85p и Pho4p (Самбук и др., 2002). Интересно отметить, что комплекс Hsp90p взаимодействует с белками Pho4p, Gtrlp, Pho84p, Pho86p, Pho88p (Zhao et al., 2005). Сопоставление наших результатов с этими данными позволяет предположить возможность существования, так называемой, регуляторной петли. С одной стороны, в условиях недостатка фосфата в среде, белок Pho4p корректирует уровень транскрипции гена HSP82, а с другой стороны, шаперон Hsp90p взаимодействует с белком активатором Pho4 и контролирует его конформацию, а также конформацию белков - переносчиков фосфата, что способствует поступлению фосфата в клетку.

3.5. Идентификация ортолога гена PHOS5 дрожжей Pichiapastoris

Для того, чтобы подтвердить универсальность выявленных закономерностей мы выбрали дрожжи P. pastoris. К преимуществам P. pastoris относятся: простота культивирования и возможность применения методик, которые разработаны для сахаромицетов. Дрожжи P. pastoris способны продуцировать на высоком уровне чужеродные белки как внутриклеточные, так и секреторные; проводить многие посттрансляционные модификации, такие как гликозилирование, формирование дисульфидных связей и протеолитический процессинг и поэтому являются важным биотехнологическим объектом. В настоящее время более двухсот белков получено с помощью этой экспрессионной системы (Cregg et al., 2000).

В отличие от дрожжей-сахаромицетов у P. pastoris ведущую роль в метаболизме играет дыхание, а не брожение.

У дрожжей этого вида идентифицирована только репрессибельная КФ, кодируемая геном РрРНО!(Payne et al., 1995). Регуляция транскрипции PpPHOl не изучена. Консервативность структуры циклин-зависимых фосфопротеинкиназ у эукариот, позволила нам предположить наличие ортолога гена РН085 у дрожжей Р. pastoris. До сих пор у дрожжей P. pastoris гены циклин-зависимых протеинкиназ не были идентифицированы.

Исходным штаммом для поиска ортолога РН085 послужил штамм GS115 (his4) (Invitrigen). Для получения дизрупции гена РН085 была сконструирована плазмида pJGP16. Схема конструирования представлена на рис.7.

Фрагмент Pvull плазмиды PIC9, содержащий ген HIS4 встраивали по сайту SnaBl в плазмиду P85-WT. Полученная плазмида pYGP16 была использована для дизрупции гена РН085 у P. pastoris. Плазмиду pJGP16 обрабатывали рестриктазами BamHI и Sail и фрагмент ДНК размером 4370 п.о., содержащий конструкцию pho85::HIS4, использовали для интегративной трансформации штамма P.pastoris. Трансформантов отбирали на среде без гистидина. Клоны His+ могли появиться на селективной среде либо в результате гомологичной рекомбинации с хромосомной копией гена HIS4, либо за счет интеграции в какой-либо ген, гомологичный генам CDK сахаромицетов, возможно РН085.

0шмНЦЬ

Следует отметить, что все, выросшие на среде без гистидина колонии отличались мелким размером. Определение активности КФ на поверхности колоний

дрожжей на среде с фосфатом (1 г/л) выявило наличие активности КФ у трансформантов. Конститутивный синтез КФ у трансформантов НЗб"1" позволил предположить, что они возникли за счет интеграции конструкции р/ю85::!/№4 в ген Р. раз1оп$, который является ортологом Бс РН085. Факт интеграции был подтвержден ПЦР (Попова, 2002). У полученных штаммов ' определяли активность КФ, накопление гликогена, рост на различных, источниках азота как на среде с глюкозой, так и на среде с метанолом в качестве источника углерода, а также/оценивали рост штаммов на различных'источниках углерода.' Результаты представлены в таблице 4. Как видно, дизрупция ортолога РП085 у /'./мл/от ' приводит к конститутивному синтезу КФ и накоплению гликогена на среде с фосфатом.'

рПо35

Рис.6. Схема конструирования ллаэмнды р.ЮР16

' Таблица 4.

Фенотипическая характеристика штаммов С8115 рИо85:.7//5-/

Штаммы Активность КФ(ПЕПФО) Окраска в парах иода глюкоза метанол

0,005% пролин супьф07, аммокт 0,005% пролин сушфп* ЗММ01М1

08115 - + +. ■ + +,

05115 рИо85::Ш54 + + + + +

Отсутствие функциональной киназы РЬо85р у Р.разЮпз не влияет на катаболизм пролина на среде с глюкозой в качестве источника углерода. В то же время замена источника углерода на метанол ведет к отсутствию роста штаммов рИо85::Н1$4 на среде с пролином в качестве источника азота, что, возможно, связано со спецификой метаболизма углерода метилотрофных дрожжей.

Таким образом, используя для прерывания гена ортолога PH08S у Р. pastoris ДНК PHOS5 сахаромицетов, мы выявили новый селективный маркер и продемонстрировали зависимость фенотипических проявлений мутации pho85Pp от источника углерода. Полученный штамм использовали при создании продуцентов белков человека и животных (Падкина и др., 2005). В заключительной части этого раздела рассмотрена эволюция функций CDK - ортологов Pho85p у представителей Царств миксомицетов, Грибов и Животных. Продемонстрировано, что эти киназы обеспечивают интегральный ответ клетки на изменения окружающей среды, в частности, на голодание. Спектр действия киназы Pho85p у дрожжей-сахаромицетов максимален, что, вероятно, связано с формированием 10 циклин-киназных комплексов. Киназа Pho85p S. cerevisiae способна участвовать не только в регуляции метаболизма фосфора, но и в регуляции клеточного цикла, организации цитоскелета, в ответе клетки на голодание и обеспечении адаптации к нему.

Глава 4. Роль фосфопротеинкиназ Pho85p, Snflp, Torl,2 в реализации закона лимитирующего фактора у дрожжей (Заключение)

Исследование генетических механизмов, координирующих экспрессию генов различных метаболических путей в ответ на действие лимитирующего фактора, позволило получить новую информацию относительно роли CDK Pho85p и белка-активатора Pho4p в поддержании гомеостаза клетки дрожжей и формировании адаптивных модификаций.

В процессе эволюции (в метаболизме азота, углерода, фосфора) были выработаны специфические сигнальные пути, передающие информацию о наличии в среде источников питания и регулируемые фосфопротеинкиназами Torl,2p, Snflp, Pho85p. В то же время, недостаток любого компонента питательной среды ведет к формированию общего ответа на голодание (накопление гликогена, трегалозы, переход к стадии G0), следовательно, информация о голодании реализуется ключевыми регуляторными молекулами, которые и обеспечивают общий ответ.

В нашей работе в качестве инструмента для изучения механизмов, координирующих ответ клетки на лимитирующий фактор, была использована модель регуляции КФ. Обилие плейотропных эффектов, характерных для мутаций в гене РН085, а также генетическая нестабильность большинства мутаций в этом гене, сделало его наиболее вероятным претендентом на роль ключевого белка — координатора.

На первом этапе мы исследовали плейотропные эффекты мутаций в гене РН085. Генетический анализ признаков Ts и «дыхательная некомпетентность» показал, что эти признаки наследуются независимо от мутации pho85. Факт, что они выявляются у большинства исследуемых мутантов pho85 (Santos el al., 1995) указывает на то, что их возникновение закономерно связано с мутациями в гене РН085. Исследование штаммов с дизрупцией гена Р1Ю85 позволило продемонстрировать высокую скорость накопления этих признаков в митотическом потомстве, что свидетельствует об участии CDK Pho85p в поддержании стабильности ядерного и митохондриалыюго генома клетки.

Генетическое и цитологическое изучение клонов Eth", возникающих на фоне дизрупции гена РН085, показало, что все они являются [rhoO], то есть не содержат митДНК. Потери митДНК могут быть связаны как с нарушением трансмиссии митДНК в почку, так и с нарушением транспорта самой митохондрии, который зависит от структуры цитоскелета. Цитологические и биохимические исследования выявили нарушения в структуре цитоскелета у мутантов pho85.

Анализ нуклеотидной последовательности гена Р/Ю85 у имеющихся мутантов выявил мутации, изменяющие третичную структуры киназы. Эти мутанты были использованы для поиска генов, кодирующих белки - шапероны кииазы Pho85p. Следует отметить, что в настоящее время такие белки не идентифицированы. При изучении доминантных супрессорных мутаций, подавляющих проявление pho85-3, pho85-7, нам удалось обнаружить несколько генов (DSP1-DSP5), в которых возникают доминантные мутации, восстанавливающие регуляцию гена PHOS. Один из генов сцеплен с РН085, расположен от него на расстоянии 2,1 сМ и, возможно, соответствует гену EGD1, кодирующему структуру белка-шаперона.

Всестороннее изучение функций киназы Pho85p позволило нам подойти к решению основного вопроса нашего исследования - возможна ли коррекция метаболизма на генетическом уровне регуляторными белками системы, отвечающей на определенный лимитирующий фактор?

С этой целью мы оценивали влияние мутаций в генах РНО на способность дрожжей использовать различные источники азота. При этом оказалось, что мутанты pho85, в отличие отphoSO и pho4, не способны расти на среде с пролином в качестве единственного источника азота (Pro"). Генетический анализ показал, что отсутствие роста на среде с пролином является плейотропным эффектом мутации pho85. В дальнейшем было показано, что мутации pho8S блокируют транспорт пролина в клетку, а также ведут к накоплению токсичных промежуточных соединений, что косвенно указывает на дисбаланс уровня ферментов катаболизма пролина - Putlp и Put2p. Реверсии к росту на среде с пролином у мутантов pho8S происходили за счет дополнительных мутаций в гене РН04.

Мы показали, что мутанты pho85 не растут на среде с пролином, а у двойных мутантов pho85 pho4 — восстанавливается рост, тем самым впервые была продемонстрирована возможность того, что негативный регулятор одной системы (РЬо85р) может играть роль позитивного регулятора в другой. И, наоборот, активатор Pho4p системы регуляции КФ ведет себя как репрессор в системе утилизации пролина. Аналогичные результаты были получены для регулятора Leu3p (Boerera/., 2005).

Связь метаболизма фосфора и углерода была нами выявлена при изучении влияния регуляторных мутаций в генах РНО на уровень транскрипции гена С777, кодирующего цитратсинтазу - первый фермент цикла Кребса. В кашей работе были получены доказательства участия белков Pho85p и Pho4p в осуществлении глюкозной катаболитной репрессии гена СП7. Оказалось, что уровень экспрессии этого гена зависит от концентрации фосфата и повышается при недостатке фосфата в среде. Отсутствие Pho85p приводит к конститутивной экспрессии гена С/77 на среде с глюкозой в качестве источника углерода и с высокой, и с низкой концентрацией фосфата. Показано, что с областью промотора гена (777,

обеспечивающей глюкозную катаболитную репрессию, связывается белок, имеющий мол. массу (34 кДа), который, возможно, соответствует белку РИо4.

Результаты, полученные в нашей работе, и накопленные к настоящему времени литературные данные относительно функций киназ БпПр и Тог1,2 позволили нам предложить гипотетическую модель регуляции метаболизма клетки дрожжей в зависимости от лимитирующего фактора (рис.7).

Глюкоза

сульфат аммония фосфат

А

Глюкоза

лролин

фосфат

Спирт

сульфат аммония фосфат В

Глюкоза

сульфат аммония без фосфата

цитоплазма

Г±

РНОЗ tPHQIJ7.PH090.PH091l rtalBOp") -

Ганы "CIT1"

'Q'Htb,».

Рис.7. Активация и инактивация фосфопротеинкиназ Pho85p, Tori, 2р, Snfl р в ответ на действие лимитирующего фактора . Обозначения: черный кружок — фосфат, черные стрелки -полная активация, белые стрелки - неполная активация.' —»- активация; - инактивация

Согласно модели, важную роль в обеспечении быстрой адаптации клеток к новым условиям играет фосфорилирование или дефосфорилирование белков-регуляторов (РЬо4р, С1пЗр, М^1р и др.). Сигнал о лимитирующем факторе получает доминирующая киназа (в случае азотного метаболизма - Тог1,2р, углеродного — БпПр, фосфатного — РЬо85р), ее активация или инактивация регулирует поступление в ядро белков-регуляторов транскрипции соответствующего лимитирующему фактору пути. При этом используются одни и те же регуляторные молекулы, активность и локализация которых зависит от степени их фосфорилирования. Регуляторная молекула может быть активатором одних генов и репрессором других. Необходимым условием для такой регуляции является наличие соответствующих

рсгуляторных сайтов в промоторных областях генов, кодирующих ключевые ферменты (Boer et al., 2005).

В ряде работ (Hall, 1992; Wright, 1996) продемонстрирована повышенная частота мутаций в генах определенных метаболических путей, возникающая в ответ на длительное культивирование в условиях голодания. На среде с низкой концентрацией аденина возрастает частота реверсий Ade+ на фоне мутаций в гене ADE2 (Ilyina et' al., 1986). При длительном культивировании в среде с субоптимальной концентрацией глюкозы были отобраны штаммы с дуплицированными генами //AT, кодирующими транспортеры глюкозы (Brown et al., 1998), на среде без фосфата происходила дупликация генов РНОЗ.Р1Ю5, которые локализовались в различных хромосомах дрожжей (Mansche, 1975). Как показано в нашей работе, дизрупция РН085 приводит к появлению клонов [rhoO], накоплению ядерных рецессивных мутаций /.?, а также компенсаторных мутаций в гене Р1Ю4 (Самбук и др., 2003).

Анализ данных о влиянии мутаций phoSS на уровень экспрессии генов; вовлеченных в репликацию и репарацию ДНК, показал, что у мутантов pho85 более, чем в три раза снижен уровень мРНК генов MSH3, MSH6, вовлеченных в репарацию неспаренных оснований; и гена POL2, кодирующего структуру субъсдиницы ДНК-полимеразы е, которая обладает 3'-^5' экзонуклеазной активностью у дрожжей S. cerevisiae. Известно, что у мутантов ро/2 повышена частота спонтанных мутаций (Babudri et al., 2001), Изменение в уровне полимераз может влиять на мутабилыгость, так, снижение уровня • ДНК-полимеразы 6 приводит к чувствительности к ММС и сопровождается мутаторным фенотипом (Kokoska et al., 2000). ДНК-полимераза е вовлечена в репарацию индуцируемых УФ повреждений, замену пар оснований и может быть сенсором повреждений ДНК в S-фазе клеточного цикла (Budd a. Campbell, 2000). '

Можно предложить следующий механизм генетического закрепления адаптаций: нарушение функционирования ДНК полимеразы е приводит к повышению частоты спонтанных мутаций, а те из них, которые выгодны в данной ситуации, отбираются на фоне лимитирующего фактора. Лимитирующий фактор, действуя через систему сигнальной трансдукции, контролирует формирование модификаций, координируя метаболизм и скорость роста, и выступает в роли эволюционного фактора, который способствует появлению и отбору наследуемых изменений, повышающих жизнеспособность популяции. Таким образом, связь между модификационной и наследственной изменчивостью неслучайна (Шмальгаузен, 1946) и существует па генетическом уровне, а лимитирующий фактор может являться причиной как модификационных, так и наследственных изменений.

ВЫВОДЫ

/. Картирование мутаций аср82 ПГЛ и анализ их фенотипического

проявления показало, что ген ЛСР82 ПГЛ соответствует гену PI1085.

2. Доказано, что признаки Ts и дыхательная некомпетентность не

являются плейотропными эффектами мутаций р/ю85.

3. Обнаружено что, отсутствие киназы Pho85p приводит к

нестабильности ядерного генома, в результате чего происходит накопление ядерных мутаций ls и pho4.

• 4. Показано, что дизрупция гена РН085 приводит к нестабильному

распределению митохондриальных нуклеоидов между материнской клеткой и почкой, что является причиной высокой частоты появления клеток [rhoO].

5. Установлено, что дизрупция гена РН085 приводит к достоверному увеличению числа актиновых «заплат», что может свидетельствовать о нарушении структуры цитоскелета.

6. Идентифицированы гены, в которых возникают доминантные мутации, супрессирующие проявление миссенс-мутаций pho85-3, pho85-7. Один из них, ген DSP1, тесно сцеплен с РН085 (2,1 сМ) и, возможно, аналогичен гену EGD1, кодирующему белок-шаперон.

I 1. Впервые продемонстрировано участие белков-регуляторов Pho85p и

I- Pho4p в регуляции транспорта и катаболизма пролина.

18. Впервые обнаружено влияние фосфата на уровень глюкозной

катаболитной репрессии гена С/77 и показано, что белок - регулятор фосфатного метаболизма Pho85p способен корректировать экспрессию гена метаболизма углерода, в частности гена С/77.

9. Идентифицирован белок с мол. массой 34 кДа, который способен взаимодействовать с областью промотора гена С1Т/ и участвовать в ослаблении глюкозной катаболитной репрессии гена С/77 в ответ на голодание по фосфату.

10. Удалось продемонстрировать зависимость экспрессии гена HSP82 от концентрации фосфата и показать, что мутации в генах РНОЗ, РН085 и РН04 влияют на уровень транскрипции гена HSP82. Предложена модель регуляции транскрипции этого гена с участием регуляторных белков РНО-системы.

11. Впервые получены штаммы дрожжей Pichia pastoris с дизрупцией гена Рр РН085, являющегося ортологом гена Sc РН085 и продемонстрирована зависимость фенотипических проявлений мутаций р/ю85Рр от источника углерода.

12. Предложен принцип координированного ответа клетки на действие лимитирующего фактора.

Список публикаций по материалам диссертации:

1. Самбук Е.В., Аленин В.В., Кожин С.А. Ген ЛСР80 контролирует транспорт неорганического фосфата // Генетика.- 1985.- Т. XXI,- N9,- С. 1449-1454.

2. Кожин С.А., Самсонова М.Г., Самбук Е.В. Изучение генетического контроля экспрессии генов, контролирующих синтез кислых фосфатаз у дрожжей // Исследования по генетике.-1986.-Т. 10.-С. 41-52.

3. Самбук Е. В., Падкина М.В., Павлова H.A., Шарыпова Л.А., Мясников А.П., Смирнов М.Н. Идентификация и клонирование гена АСР80 // Вестник ЛГУ.-1988,-Сер.З.-В.4.-№24.-С.300-307.

4. Самбук Е. В., Павлова H.A., Шарыпова Л.А., Падкина М.В., Мясников А.Н., Смирнов М.Н. Генетико-биохимическое изучение кислых фосфатаз дрожжей. Идентификация и клонирование гена АСР5 // Вестник ЛГУ,- 1988.- Сер.З,- Вып.4.-С.106-117.

5. Падкина М.В., Павлова H.A., Самбук Е.В., Смирнов М.Н. Анализ функции гена ACPI дрожжей Saccharomyces cerevisiae// \II Всесоюзный симпозиум, Молекулярные механизмы генетических процессов.- Москва,- 1990,- С.250-252.

6. Белова И.В., Самбук Е.В., Падкина М.В., Павлова H.A., Смирнов М.Н. Клонирование гена ACPI - структурного гена кфЗ дрожжей S.cerevisiae// X Всесоюзный симпозиум Структура и функции клеточного ядра,- Гродно,- 1990,-С.35.

7. Самбук Е.В., Лучникова И.Л., Падкина М.В. Картирование гена АС/Ч, кодирующего структуру кфЗ дрожжей-сахаромицетов// X Всесоюзный симпозиум «Структура и функции клеточного ядра»,- Гродно,- 1990.-С.55.

8. Самбук Е.В., Лучникова И.Л., Останин К.В., Падкина М.В. Изучение влияния тиамина на активность кислой фосфатазы I дрожжей// X Всесоюзный симпозиум «Структура и функции клеточного ядра».- Гродно,- 1990.-С.66.

9. Самбук Е.В., Лучникова И.Л., Падкина М.В., Смирнов М.Н. Клонирование доминантного супрессора у дрожжей// VII Всесоюзный симпозиум Молекулярные механизмы генетических процессов,- Москва,- 1990,- с.266.

10. Белова И.В., Самбук Е.В., Падкина М.В. Изучение взаимодействия белков- активаторов транскрипции Gcn4 и Pho2, Pho4// X Всесоюзный симпозиум «Структура и функции клеточного ядра».- Гродно.- 1990,- С.35.

11. Belova I.V., Sambuk E.V., Padkina M.V., Smirnov M.N. The effect of substitution of Pho2 activator protein by Gcn4 protein on acid phosphatases synthesis in yeast// 15lh Internationale spezialized Symposium on yeast.- Riga.- 1991,- P.22.

12. Падкина M.B., Самбук E.B., Смирнов M.H., Павлова H.A., И.В.Белова. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae продуцент кислой фосфатазы дрожжей// A.c. РФ SU 1639052 А1.-МКИ С12 N I/19/-1989.

13. Падкина М.В., Павлова H.A., Самбук Е.В./Смирнов М.Н. Анализ функции гена АС./'/// В кн.: Молекулярные механизмы генетических процессов,-М.,-Наука,-1991.-С. 186-190. .

14. Самбук Е.В., И.В. Белова, Падкина М.В., Смирнов М.Н. Активаторы транскрипции Pho2 и Gcn4 в регуляции синтеза кислых фосфатаз дрожжей -сахаромицетов// 2 Всесоюзный Симпозиум " Теор. и прикладные аспекты молекул, биол. "- Самарканд,- 1991.- С.29.

15. Самбук Е.В., Кучкартаев А.И., Падкина М.В., Смирнов М.Н. Картирование генов, регулирующих синтез кислых фосфатаз у дрожжей Saccharomyces cerevisiae Петергофских генетических линий // Генетика,- 1991,-Т.27:- N4,- С. 644-648.

,16. Белова И.В., Самбук Е.В., Падкина М.В., Смирнов М.Н. Активаторы транскрипции Pho2 и Gcn4 в регуляции синтеза кислых фосфатаз у дрожжей Saccharomyces cerevisiae// Генетика.- 1992,- T.28.-N5.- С.11-18.

17. Samhuk. E.V., Belova I.V., Padkina M.V. GCN4 protein can substitute PH02 protein in the regulation of acid phosphatases synthesis in yeast// 1996.- Abstr. Of the Yeast Genetics and Molecular Biology Meeting of GSA. USA.- 1996.- 267A.

18. Padkina M.V., Karsten S.L., Sambuk E.V. Pho2 and Pho4 proteins are involved in the regulation of transcription CITI gene in yeast// Abstr. Of the Yeast Genetics and Molecular Biology Meeting of GSA. USA.- 1996,- 241 A.

19. , Sambuk E.V., Popova J.G., O.Demberelijn, Smirnov M.N. Genetic analysis of suppressors of phoSS mutations in Saccharomyces cerevisiae// 17th Int.Conf.on yeast genetics and molecular biology.- 1995,- Lisboa, Portugal.-S.89.

20. Падкина M.B., Парфенова Л.В., Самбук Е.В., Смирнов М.Н. Рекомбинантная плазмидная ДНК, обеспечивающая синтез фибробластного интерферона человека клетками дрожжей, способ ее конструирования и штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae- продуцент фибробластного интерферона человека//Патент РФ RU 2180003 С2,-МКИ С12 N 15/22.-1998 .

21. Совцов Е.М., Парфенова Л.В., Самбук Е.В., Падкина М.В. Новый тип регуляции гена PHOS у дрожжей Saccharomyces cerevisiae Н II съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров,- Тезисы докладов.- 2000.- т.2,- с. 20.

22. Попова Ю.Г., Самбук Е.В. Влияние мутаций в генах в генах РИ04 и РН085 на утилизацию пролина у дрожжей Saccharomyces cerevisiae!/II съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров,- Тезисы докладов,- 2000,- т.2,- с. 18-19.

23. Попова Ю.Г., М.В. Падкина, Е.В. Самбук Влияние мутаций в генах РН085 и РН04 на утилизацию пролина у дрожжей Saccharomyces cerevisiae II Генетика.-2000.-Т.36,-№ 12,-С. 1622-1628.

24. Самбук Е.В., Падкина М.В., Смирнова Т.М., Парфенова Л.В., Сахарова Е.Д., Смирнов М.Н. Создание штамма дрожжей Pichia pastoris- подуцента рекомбинантного пресинаптического глутаматного рецептора мозга крысы // Биотехнология -2000.- Тезисы.-2000.- с. 103.

25. Popova J. G., Sambuk E. V. Phosphate level regulates the HSP82 gene expression// X Inter. Symposium on Yeast, Papendal.-2000.- P.361.

26. Падкина M.B., Парфенова Л.В., Самбук E.B., Смирнов М.Н. Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент бета-интерферона человека. Рекомбинантная плазмидная ДНК pHIF и способ ее конструирования // Патент РФ RU 2180687 С1. -МКИ С 12 N 1/19, 15/22.-2000.

27. Падкина М.В., Парфенова Л.В., Самбук Е.В., Смирнов М.Н. Рекомбинантная плазмидная ДНК pHBS, обеспечивающая биосинтез поверхностного антигена вируса гепатита В, способ конструирования плазмиды, штамм дрожжей Pichia pastoris PS 1039pHBS) - продуцент указанного антигена // Патент РФ RU 2201452 С2.-МКИ С 12N 15/51. 15/64. 1/19. -2000.

28. Popova J. G., Sambuk E.V. Identification of homologue of the Saccharomyces cerevisiae PH085 gene encoded a cyclin-dependent protein kinase in

Pichia paslorisll XX Inter. Conference on Yeast Genetics and Mol. Biol.- Praga.- 2001.-P. 12-44.

29. Самбук E.B..Падкина M.В., Смирнова Т.М., Парфенова Л.В., Сахарова Е.Д., Смирнов М.Н. Создание штамма дрожжей Pichia pastoris- подуцента рекомбинантного пресинаптического глутаматного рецептора мозга крысы // Биотехнология,-2001 .-N 2,-с. 23-30.

,30. • Самбук Е.В., Попова Ю.Г., Падкина М.В. Генетический анализ спонтанных супрессоров мутаций pho85 у дрожжей Saccharomyces cerevisiae ■ II Генетика,-2003.-Т.39.-№ I.-С. 18-24.

31. Самбук Е.В., Попова Ю.Г., Падкина М.В. Изучение влияния фосфата и мутаций в генах РН085, РН080, РН04 на транскрипцию гена HSP82 у дрожжей Saccharomyces cerevisiae!! Вестник СПбГУ2002.- Т.2 .- С. 34-41. <

32. Парфенова J1.B., Самбук Е.В., Смирнов М.Н., Падкина М.В. Продукция ß-интерферона в дрожжах Saccharomyces cerevisiae ведет к снижению активности цитохром С-оксидазы//Биотехнология.-№ 6.-2002.-С.3-10. •

33. Самбук Е.В., Падкина М.В., Парфенова Л.В., Смирнов М.Н. Влияние продукции гетерологичных белков на метаболизм штаммов-продуцентов // Цитокины и воспаление.-2002.-T. 1.-С.29-30.

34. Падкина М.В., Парфенова Л.В., Пантелеева И. Г., Самбук Е.В., Смирнов М.Н. Производство белков человека в клетках дрожжей // Цитокины и воспаление.-2002.- Т.1-С.30.

35. Падкина М.В., Парфенова Л.В., Самбук Е.В., Смирнов М.Н. Продукция рекомбинантных цитокинов высших эукариот дрожжами//Тез. 1-го международного конгресса «Биотехнология- состояние и перспективы развития»,- Мрсква,- 2002,-С.63.

36. Падкина М.В., Парфенова Л.В., Самбук Е.В., Смирнов М.Н. Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент лейкоцитарного интерферона-16 человека, рекомбинантная плазмидная ДНК pHIN и способ ее конструирования // Патент РФ RU 2203950 Cl.-МКИ С 12 N 15/21, 15/23, 1/19.-2002.

37. Градобоева А.Е., Падкина М.В., Парфенова Л.В., Самбук Е.В., Смирнов М.Н. Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент внутриклеточного иммунного интерферона быка, рекомбинантная плазмидная ДНК, обеспечивающая биосинтез внутриклеточного иммунного интерферона быка и способ конструирования рекомбинантной плазмидной ДНК pBIG // Патент РФ RU 2203950 Cl.- МКИ С 12 N 1/19,15/23,15/81.-2002.

38. Самбук Е.В., Попова Ю.Г., Физикова А.Ю., Падкина М.В. Генетический анализ плейотропных эффектов мутаций pho85 у дрожжей Saccharomyces cerevisiae Н Генетика. -2003. -Т.39,- №8. -С. 871-877.

39. Падкина М.В., Тарасов С.А., Карстен СЛ., Парфенова Л.В., Попова Ю.Г., Самбук Е.В. Влияние мутаций pho85 на катаболитную репрессию гена С/77 у дрожжей Saccharomyces cerevisiae II Генетика.- 2003.- T. 39,- №6,- С.732-738.

40. Padkina M.V., Parfenova L.V., Panteleeva I.G., Gradoboeva A.E. Dobrogorskaya M.V., Sambuk E.V., Smirnov M.N. Comparative studies of human and animal interferon genes expression in yeast Saccharomyces cerevisiae and Pichia

pastorisll Abstr. of Intern. Forum" Biotechnology and the present".- S.-Petersburg.- 2003.-P.7-8.

41. Panteleeva I.G., Alekseeva M.F., Sambuk E.V., Padkina M.V. Optimization of cultivation process of methylotrophic yeast Plchia pastoris strain — producer of recombinant human interferon -al6 // Abstr. of 2nd Intern. Congr. " Biotechnology - state of the art and prospects of development". - Moscow.-2003.-P. 153-154.

42. Савинов B.A., Физикова А.Ю., Самбук E.B. Генетический контроль экспрессии гена Р1Ю5 в зависимости от источника азота в среде у дрожжей Saccharomyces cerevisiae// Тез. Конф. « Биология - наука XXI века»,- 7-ая Пущинская школа -конф. молодых ученых. -С.372.

43. Fizikova A. Y., Zakcharova К. V., Sambuk E.V. The role of cdk Pho85p in mitochondrial distribution in yeast S. cerevisiae// Abstr. Of XXII Inter. Conference on Yeast Genetics and Mol. Biol.-Bratislava.-2005.-A.10-10.

44. Smirnov A., Fizikova A. Y., Sambuk E.V. Study of the influence of mutations in the regulatory genes of the PHO system on mutation rates of the cell of the yeast Saccharomyces cerevisiae //Abstr. Of XXII Inter. Conference on Yeast Genetics and Mol. Biol., Bratislava.- 2005,- A.6-19.

45. Savinov V.A., Fizikova A. Y., Sambuk E.V. New mechanisms regulating gene РНОЗ and PHOS expression in yeast Saccharomyces cerevisiae depending on medium composition // Abstr. of XXII Inter. Conference on Yeast Genetics and Mol. Biol.-Bratislava.-2005.-A.7-6.

46. Самбук E.B. Генетические механизмы реализации закона лимитирующего фактора у дрожжей Saccharomyces cerevisiae // Журнал Общей Биологии,-2005.-Т. 66.-№4,-С. 310-325.

47. Самбук Е.В., Физикова А.Ю., Захарова К.В., Смирнов A.M., Падкина М.В. Отсутствие циклинзависимой фосфопротеинкиназы Pho85p приводит к нарушению распределения митохондриальных нуклеоидов у дрожжей Saccharomyces cerevisiae И Цитология. - 2005. Т. 47.-№10.- С. 917-924.

Подписано в печать 23.06.06. Формат 60x84 1/16.

Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. листов 1,86. Тираж 100 экз. Заказ № 17

ЦОП типографии Издательства СПбГУ 199061, С-Петербург, Средний пр., д.41.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

по праву и юриспруденции, автор работы: Очир-Гаряева, Ирина Калиновна, кандидата юридических наук

ВВЕДЕНИЕ КАЛМЫКИИ В СИСТЕМУ ГОСУДАРСТВЕННОГО УПРАВЛЕНИЯ РОССИИ: ИСТОРИКО-ПРАВОВЫЕ АСПЕКТЫ (70 -е гг. XVIII в. - первая половина XIX в.)

12.00.01 - теория и история права и государства; история учений о праве и государстве

Диссертация на соискание ученой степени кандидата юридических наук

Научный руководитель: доктор юридических наук профессор Пахомов В.Г.

Москва

СОДЕРЖАНИЕ

Введение

Глава I. Нормативно-правовой статус калмыков до официального вхождения в состав России.

1.1. Договорные отношения пребывания калмыков на российской территории до откочевки 1771 г.

1.2. Социальная структура калмыцкого народа.

Глава II. Правовое регулирование вводимых форм управления калмыцких кочевий в России в 1771 -1801 гг.

2.1, Введение губернского управления.

2.2. Правовые основы деятельности Экспедиции калмыцких дел (1771-1786 гг.), калмыцкой канцелярии и калмыцкого правления (1788-1801 гг.)

Глава III. Наместничество и установление попечительской системы управления Калмыкией (1801-1847 гг.).

3.1. Положение о наместничестве и правовое оформление приставства.

3.2. Попечительская система управления Калмыкии в середине XIX в.

ВВЕДЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

по теме "Введение Калмыкии в систему государственного управления России: историко-правовые аспекты"

Актуальность исследования

В связи с исполняющимся в 2009 году 400-летием добровольного вхождения калмыцкого народа в состав Российского государства, а также в целях укрепления межнациональных отношений был издан Указ Президента РФ В.В. Путина «О праздновании 400-летия добровольного вхождения калмыцкого народа в состав Российского государства». В соответствии с Указом были утверждены план основных мероприятий, связанных с подготовкой и проведением празднования 400-летия добровольного вхождения калмыцкого народа в состав России и состав организационного комитета по представлению органов государственной власти Республики Калмыкия.

На современном этапе одной из центральных задач государственного управления в Российской Федерации является оптимизация федерации. Принципиальное значение имеют устойчивые выверенные отношения центра и субъектов РФ. Государственное строительство имеет генетические корни времен и бывшей Российской империи. В практике современного государствоведения важное значение имеет и использование опыта управления регионами дореволюционной России.

Россия - страна многонациональная и многоконфессиональная, объединяющая народы, стоявшие в свое время на разных уровнях культурного развития. Со многими из них отношения складывались сложно, а нередко и драматично. Калмыки - один из таких «трудных» народов. Осмыслить, на каких государственно-правовых основаниях внедрялась российская система государственного управления в регионе, населенном калмыками, представляет не только исторический, но и современный практический интерес.

Предки калмыков - западные монголы-ойраты, история которых берет начало в первых столетиях нашей эры, играли заметную роль в средневековой истории центральной Азии. На рубеже XVI-XVII веков основная их часть, обитавшая в степях Монголии и Китая (Джунгарии - между горами Алтая и Восточного Тянь-Шаня), откочевала на юго-запад в степную часть низовьев Волги, где они и осели, где стала зарождаться особая монголо-язычная народность калмыцких племен (торгоуты и дербеты), получившая у соседних народов этническое название - калмыки.

Степи Нижнего Поволжья стали ареной соприкосновения двух культур: кочевой и оседлой. Два мира взаимообогащались и дополняли друг друга не только в формах хозяйствования, общественной жизни, но и управления. Вхождение калмыцкого народа в состав России - результат взаимной заинтересованности. В то же время появление на этой территории России калмыков, уже имевших элементы некоторой государственности, создало определенные трудности в их политической адаптации в рамках Российской империи. Эти факторы определили в течение практически двух столетий особенности содержания русско-калмыцких отношений.

История этих отношений дала, на наш взгляд, наиболее приемлемую форму политической интеграции: в середине XVII века образовалась вассальная калмыцкая государственность в составе России. Институты общественной организации калмыков в условиях политической зависимости от российского государства постепенно видоизменялись. Российское правительство постоянно пыталось ограничить полномочия и самостоятельность хана. С этой целью вводится институт наместничества. Исследуемый период внутриполитической деятельности России и его политико-правовые явления не могут не иметь уроков для государственного строительства России и следовательно требуют специального исследования.

Состояние научной разработанности темы.

Учеными проделана большая работа по изучению различных политико-правовых проблем развития Калмыкии. Эти исследования не равноценны как по содержанию рассматриваемых вопросов, так и по своей значимости.1

Исследование истории введения калмыков в систему государственного управления России началось одновременно с решением проблемы национально-государственного устройства влившегося в состав государства нового народа. Обращение к истории калмыцкого народа, изучение его социально-политического устройства способствует развитию такой области ориенталистики, как исторического монголоведения. Именно теоретическое и практическое взаимодействие на стыке монголоведения и отечественной истории обусловливает заметные успехи в изучении государственности и права Калмыкии.

Исследователи пытались решить вопрос о том, какими целями руководствовалось царское правительство, принимая калмыков в подданство России, и почему оно на первом этапе допускало известную политическую, правовую и экономическую независимость Калмыцкого ханства в составе России.

Более 160 лет назад И.Я.Бичурин (Иакинф) писал: «Российский двор, приняв в подданство калмыков, имел в виду найти в них сильную помощь против врагов своих на юго-востоке.».2 Его мнение разделяли последующие исследователи.3 Но была и другая причина - царское правительство, не имея возможности «силою

1 См.: Кичиков М.Л. Исторические корни дружбы русского и калмыцкого народов. Образование Калмыцкого государства в составе России. - Элиста, 1966.

2 Историческое обозрение ойратов или калмыков с XV века до настоящего времени // Журнал Министерства внутренних дел. СПб. - 1833. - июль, С. 299.

3 Броневский В. Описание Донской земли, нравов и обычаев ее жителей. Ч. III., СПб., 1834, С. 57; Бюллер Ф.А. Инородцы в Астраханской губернии. - Отечественные записки: СПб., 1846, июль, статья 1, С. 176. оружия усмирить и держать в покорности» калмыков, вынуждено было лавировать и одновременно с этим оно1 «весьма искусно», «пользовалось их военными услугами», «прощая их мелкие провинности, грабежи и разорения».2

И, наконец, ряд исследователей обращает внимание и на экономическую заинтересованность правительства в калмыках. В частности, Н.И.Страхов с полным основанием писал о миллионах десятин «бесплодной и иссушенной солнечным зноем земли», превращенных калмыками в «миллионные табуны и стада, . в надежный и богатый конный и скотный двор для целой России». Таковы цели.

В то же время имела место и политика правового ограничения подданных калмыков. Н.А. Нефедьев и М.Г. Новолетов истоки правительственного надзора в Калмыцкой степи относили к началу XVIII века.4 В исследованиях дореволюционных ученых этот вопрос решен не был.

В 1771 г. значительная часть калмыков ушла из России. В чем причина этого явления? Большая часть исследователей видит субъективные причины, утверждая, что причина ухода связана с ограничением прав назначенного наместника Убаши, слухах о намерении правительства принудить калмыков к оседлой жизни и о превращении их в военное сословие и т.п. Несомненно, все эти факты имели место, но как нам представляется, главное здесь -попытки ограничить правовую самостоятельность калмыков. Хотя добровольность вхождения в состав России, потребность в политической поддержке, военных и экономических ресурсах

1 Костенков К.И. Исторические и статистические сведения о калмыках, кочующих в Астраханской степи. СПб., 1870, С. 13; Его же. Положение хозяйства и промышленности в калмыцком народе. - Калмыцкая степь по исследованиям Кумо-Маныческой экспедиции. 4.III, Гл. 4. СПб., 1868, С. 11.

2 Прозрителев Н.Г. Военное прошлое наших калмыков. Ставрополь. 1912, С.35,46.

3 Страхов Н.И. Нынешнее состояние калмыцкого народа. СПб., 1810, С. 97.

4 Нефедьев Н.А. Подробные сведения о волжских калмыках, собранные на месте. СПб., 1834, С. 286; Новолетов М.Г. Калмыки. Исторический очерк. СПб., 1884, С. 77.

Калмыкии, наличие относительно сильной государственной организации у калмыков - все это обуславливало известную осторожность царского правительства в проведении политики ограничения калмыков (по крайней мере, на первом этапе вхождения калмыков в состав России).

Но по мере укрепления государственности в России на протяжении восемнадцатого века (годы царствования Елизаветы и Екатерины II) правительство шаг за шагом усиливало наступление на политические права калмыцких владельцев и в конце концов эта великодержавная политика закономерно привела к негативным последствиям, выразившимся в откочевке (уходе) большинства калмыцких племен.

Ряд дореволюционных исследователей пытались доказать филантропический характер намерений правительства в отношении калмыцкого народа. Так, Н.А.Нефедьев утверждал, что правительство всегда занималось усовершенствованием постановлений для калмыков, заинтересованное в благоденствии их.1 Изменение политического курса России в конце XVIII - начале XIX века по отношению к Калмыкии не получило достаточно полной и объективной оценки в дореволюционной историографии. Ф.А.Бюллер, К.И.Костенков, Н.А.Нефедьев и др. считали реформы царского правительства «благодетельными», предпринятыми ради совершенствования системы управления и улучшения благосостояния калмыцкого народа.

Вопросы правового регулирования общественных отношений калмыков, установление общегосударственного порядка управления нашли свое отражение, как в дореволюционной, так и в современной литературе. Однако следует отметить, что большинство работ рассматривает преимущественно этнографические и исторические

1 Нефедьев Н.А. Указ. соч. - С. 280. аспекты этих явлений. Более глубокое и полное изучение правового статуса присоединенных народов является одной из задач современной историко-правовой науки.

Калмыки, войдя в состав России, сохранили свод законов, принятый в 1640 году на съезде монгольских, ойратских и калмыцких ханов. Этот свод в литературе получил название: «Монголо-ойратские законы», «Степное Уложение», «Великое Уложение» и стал предметом пристального изучения со стороны русских правоведов и востоковедов: К.Ф. Голстунского, Ф.И. Леонтовича, И.Я. Гурлянда, М.Г. Новолетова, Ю.И. Лыткина, A.M. Позднеева, Н.Я. Бичурина.1

Однако следует иметь в виду, что исследования этих документов, а так же обычного и писаного права калмыков в дореволюционный период в основном преследовало цель использовать их как источник для изучения социально-экономического строя.

Что касается исследований советского времени, то их немного и большинство из них также посвящены экономическому и социальному положению калмыцкого общества более позднего периода (второй половины XIX и началу XX вв.). И лишь с 30-х гг. XX века начались первые исследования советских ученых по истории калмыков. К ним следует отнести труды Н.Н. Пальмова, Г.З. Минкина и других.2 В частности, последний, характеризуя Калмыкию как колониальную окраину России, правовых аспектов практически не затрагивал.

После репрессий против калмыцкого народа, имевших место в годы Великой Отечественной войны (в 1943-1944) исследования по

1 Голстунский К. Ф. Монголо-ойратские законы 1640года. СПб. 1880; Леонтович Ф. И. К истории права русских инородцев. Древний монголо-калмыцкий или ойратский устав взысканий. Одесса. 1879. и др.

2 Минкин Г.З, Об общественном строе Калмыкии и колониальной политике царизма. Элиста. 1968; Пальмов Н.Н. Указ. соч. Ч. 5. Астрахань, 1932 социальной, политической и правовой истории Калмыкии были прерваны. Возобновлены они были только в 60-ых годах после восстановления государственно-национальной единицы калмыцкого народа в начале в качестве автономной области в составе Ставропольского края (1957), а потом в виде АССР (июль 1958). Среди авторов, активно разрабатывающих эти вопросы, следует отметить П.С. Преображенскую, M.J1. Кичикова, Т.И. Беликова и других. К сожалению, в настоящее время исследования, посвященные истории управления Калмыкией в составе России, практически не выходят за рамки чисто исторических. К таким работам можно отнести исследования А.Г. Метирова, И.В. Нахаевой, К.Н. Максимова и некоторые другие.

Анализ причин колонизации Калмыцкой степи интересно представлен в работе Н.Н. Пальмова.1 Однако вопросы управления калмыцким народом им практически не рассматриваются.

В 1967 году выходит в свет первый обобщающий труд по истории калмыцкого народа - «Очерки истории Калмыцкой АССР. Дооктябрьский период». Одним из авторов «Очерков» Н.В. Устюговым была предпринята попытка раскрыть суть попечительской системы управления калмыцким народом. Им были проанализированы законодательные акты 1825, 1834 и 1847 годов. По мнению автора, «Положения» 1834 и 1847 годов подчинили все управление калмыками последовательно проводимой системе административной опеки. И, таким образом, оправдывая свои действия заботой о благосостоянии калмыцкого народа, царское правительство все более подчиняло себе этот кочевой народ.

Много внимания уделила исследованию Калмыкии J1.C. Бурчинова.2 В 1967 году выходит ее статья «Колониальная политика

1 Пальмов Н.Н. Этюды по истории приволжских калмыков. 4.5. Астрахань, 1932.

2 Бурчинова Л.С. Колониальная политика царизма в Калмыкии в русской историографии. // Вестник института. Элиста, 1968; Из истории управления калмыцким народом (XIX век). // Труды молодых ученых Калмыкии. царизма в Калмыкии в русской историографии». Эта статья являлась первым опытом изучения русской историографии по указанной проблеме.

Определенный интерес представляют также работы А.А. Чужгинова. В своих анализах1 автор обращал внимание на вопросы эволюции социально-экономического строя, административного устройства и системы управления калмыцким народом во второй половине XVIII века и первой половине XIX века, данных в работах дореволюционных и советских авторов.

К одной из последних работ, затрагивающих данную проблему, относится книга К.Н. Илюмжинова и К.Н. Максимова «Калмыкия на рубеже веков». В первой главе книги авторы прослеживают историю калмыцкого народа с момента принятия им российского подданства до начала XX века. Причины проведения административных реформ в Калмыкии во второй четверти XIX века исследователи находят еще в период приставства, т.е. в начале века. По их мнению, постоянный контроль и надзор со стороны Главного пристава Н.И. Страхова за деятельностью наместника, Зарго вызывали у последних недовольство и раздражение. Все эти факторы, включая подчинение согласно именному Указу от 26 октября 1863 года Главного пристава и суда Зарго Астраханскому военному губернатору, стремление царских властей определить правовой статус Калмыцкой степи в Российском государстве привели к кризису в управлении калмыцким обществом. Эти кризисные явления были, по мнению авторов, «не случайными, они явились продолжением кризиса национальной государственности,

Вып. 3, 1973; Определение правового статуса калмыцкого крестьянства в системе российской государственности. // Общественный строй и социально-политическое развитие дореволюционной Калмыкии. Элиста, 1983 и др.

1 Чужгинов А.А. О некоторых историографических проблемах истории Калмыкии, (конец 18- первая половина 19 вв.) // Вестник института. Серия 15. Элиста, 1976 и др.

2 Илюмжинов К.Н., Максимов К.Н. Калмыкия на рубеже веков. - М.; 1997. возникшего с уходом значительной части калмыков из России».1 Авторы справедливо отмечают, что одной из причин проявления подобного кризиса явилась и реформа управления инородцами, завершенная в 1822 году.

Из представителей современной юридической науки представляет интерес диссертационная работа И.Ч.Аксенова, в которой проанализированы процессы становления и развития Л калмыцкой государственности и права в XVII - XIX веках.

Таким образом, проведенный экскурс к трудам ряда авторов свидетельствует о том, что проблема введения Калмыкии в общегосударственную систему управления России исследована пока явно недостаточно. Комплексного монографического исследования, посвященного данной проблеме, до настоящего времени предпринято не было. Представленная работа - попытка в некоторой степени устранить этот пробел. Ее актуальность определила тему диссертации.

Объектом исследования являются государственно-правовые институты и правовые акты, в том числе материалы Архива внешней политики Российской империи историко-дипломатического управления Министерства иностранных дел РФ (АВПРИ), Национального архива Республики Калмыкия (НАРК), регулирующие деятельность и взаимоотношения государственных органов власти и управления, политико-правовые идеи и взгляды государственных деятелей, ученых, повлиявшие на характер организации государственного управления в Калмыкии и оценивающие ее состояние в позитивном и критическом планах.

Предметом исследования выступают историко-правовые аспекты генезиса государственного управления Калмыкии в период

1 Там же.-С.31.

2 Аксенов И.Ч. Становление и развитие калмыцкой государственности и права в XVII-XIX вв.: Автореф. дис. канд. юрид. наук. Ставрополь, 2004. - С. 23 . становления общеимперского управления данным регионом, отношений центральных и местных органов государства, структура, компетенция и деятельность национального аппарата управления.

Цели и задачи исследования.

Целью работы является изучение политико-правовых процессов в Калмыкии в указанный период и связанного с ними политического курса России.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- раскрыть содержание и направленность правовой политики российского правительства в национальных окраинах на примере Калмыцкой степи; рассмотреть структуру государственных учреждений, как центральных, так и местных органов управления калмыцким народом и правовое обеспечение их деятельности; изучить расстановку политических сил в калмыцком обществе в указанный период.

Теоретическая и источниковедческая база.

Источниковую основу диссертации составляют как опубликованные, так и неопубликованные архивные документальные материалы.

Значительную по объему группу опубликованных источников представляют собой законодательные акты Российской империи в «Полном собрании законов Российской империи».

Ценным источником для изучения общественного и административного устройства Калмыцкой степи являются Монголо-ойратские законы «Их цааз» (Великое уложение).1 Принятые в 1640 году на съезде монгольских, ойратских и калмыцких правителей См.: Их Цааз (Великое уложение). Памятник монгольского феодального права 17 в. - М. « Наука».-1981. законы дают картину сложных взаимоотношений в кочевом обществе.

Богатый и фактически не введенный в науку материал хранится в архивах. Самыми крупными хранилищами остаются Национальный архив Республики Калмыкия (НАРК) и Архив внешней политики российской империи министерства иностранных дел Российской Федерации (АВПРИ).

Фонды НАРК образовались после выделения калмыковедных материалов из Астраханского областного архива, где они хранились в Фондах астраханского губернатора. По своему содержанию все эти документы можно условно разделить на следующие группы:

1) документы судов, тяжебные дела, характеризующие взаимоотношения калмыцкого населения с представителями других национальностей, с русской администрацией и со своими владельцами;

2) материалы заседаний калмыцкого управления, определяющие контроль за представителями русской администрации в калмыцких улусах - приставами, взаимоотношения калмыцкой знати с губернскими органами управления;

3) отчеты астраханских административных органов, в которых сосредоточены наиболее обстоятельные сведения о составе калмыцкого управления, состоянии экономики в Калмыцкой степи, народонаселении и т.д.

Проблему неполной сохранности национального архива прикрывают фонды АВПРИ, где более высокий уровень сохранности документов позволяет значительно восполнить пробелы при анализе материалов НАРК. Фонд 119 «Калмыцкие дела» в АВПРИ образовался по линии деятельности Коллегии иностранных дел. По интересующему периоду нами выявлены и изучены более 300 дел.

Анализ фондов НАРК, АВПРИ МИД РФ позволяет выделить наиболее значимые группы документов и материалов. Большой пласт информации содержат написанные на Зая-пандитской письменности письма калмыцких ханов, нойонов и простых людей. В них мы находим объяснения тех событий, которыми была богата политико-правовая история Калмыкии конца XVIII века. Наиболее значительные послания адресовались ко двору и зачастую дублировались письмами в Астрахань. Недостатком этих документов была определенная предвзятость авторов, относившихся порой к противоборствующим политическим лагерям и выражавших противоположные сведения. В этом случае большое значение приобретает группа русскоязычных документов, носивших отчетный характер.

Хронологические рамки исследования охватывают период в истории калмыцкого народа с 1771 года до середины XIX века. Период начинается откочевкой большей части калмыков из пределов России. После чего, рескриптом Екатерины II Калмыцкое ханство было ликвидировано. Начался новый этап в истории калмыцкого народа. На протяжении последней трети XVIII - первой половины XIX вв. происходил интенсивный процесс реорганизации системы управления калмыцкими кочевьями. В работе имеются и некоторые хронологические отступления, охватывающие более ранний период, что объясняется необходимостью анализа основных предпосылок ухода калмыцкого народа из России.

Территориальные рамки исследования

Войдя добровольно в состав России в начале XVII века, калмыки заняли территорию в пределах Астраханской и частично Ставропольской губерний. Эта территория стала именоваться «Калмыцкая степь», «Калмыкия». История управления приволжскими калмыками в рассматриваемый период - это история управления той их части, которая осталась в России после 1771 года и в дальнейшем явилась основой калмыцкой нации.

Таким образом, территориальные рамки охватывают бывшее Калмыцкое ханство, в нынешних границах Республики Калмыкия и некоторых частей Ставропольского края и Астраханской области.

Методологическая база исследования. В процессе исследования автор руководствовался диалектическим методом научного познания, предполагающим исследование всех процессов и явлений в их развитии, взаимосвязи и взаимообусловленности. Использовались также системный, сравнительно-правовой, исторический, структурно-функциональный и другие методы познания, а также принципы единства исторического и логического, абстрактного и конкретного. Это дало возможность рассматривать проблему включения калмыцких кочевий в состав империи в связи с особенностями социальной организации калмыцкого народа, а также с развитием российской государственности и права.

Научная новизна диссертации определяется:

Во-первых, тем, что при рассмотрении вопроса управления калмыками, как составной части российских инородцев, сделан акцент на политико-правовые аспекты и предпринята попытка проанализировать правовые процессы формирования правительственной политики по отношению к калмыцкому народу;

Во-вторых, тем, что впервые вопросы о характере социальной организации, становления государственности и права калмыков рассматриваются через их отражение в древних законодательных памятниках - кодексе «Цааджи-Бичик», законах Дондук-Даши;

В-третьих, работа в значительной части построена на основе архивных источников, впервые вводимых в научный оборот.

Научно-практическаязначимостьработы. Выводы, представленные автором, могут быть использованы в дальнейших научных исследованиях истории государства и права России, в учебном процессе, а также в решении практических задач, касающихся калмыцкого общества, связанного своими традициями и обычаями в условиях современного государственно-правового устройства Республики Калмыкия.

Положения, выносимые на защиту.

1. Становление системы государственного управления в Калмыкии проходило в условиях использования общеимперских принципов на основе гибкого применения общегосударственных подходов и политико-правовых институтов, в сочетании их с национальными особенностями калмыков, с учетом сложившихся систем традиционного управления и обычного права калмыцкого народа.

2. Основными тенденциями в развитии государственного управления в Калмыкии являются локализация власти в регионе в сочетании с централизацией, когда в системе отношений «центр -регион», центральной властью выступает правительство, а его местным уровнем и представителем на территории Калмыкии астраханский губернатор и специальное подразделение по калмыцким делам (экспедиция, канцелярия, управление).

3. Система органов государственного управления в Калмыкии строилась на основе уже имевшегося опыта деятельности подобных учреждений, доказавших жизнеспособность в других регионах страны, но с учетом особенностей данной национальной окраины.

4. Верховная власть учитывала региональные особенности Калмыкии, придавая им статус системообразующих факторов при разработке законодательства в области государственного управления, хотя четко выраженной политики и концепции регионального управления тогда еще выработано не было.

5. В качестве факторов, детерминирующих особенности становления системы и организации государственного управления в регионе, выступал своеобразный социальный состав национального населения, который имел существенные отличия в этническом и в правовом сознании от населения внутренних губерний России.

6. Государственное управление в Калмыкии сочеталось с местным этническим самоуправлением и выстраивалось с учетом правового регулирования общественных отношений в условиях постоянного роста русского податного населения.

7. Современный институт представителей президента в субъектах Российской Федерации берет свое начало с практики назначения наместников, широко и эффективно использовавшихся царем, в национальных окраинах, в том числе и в Калмыкии.

8. Региональная самоидентификация прибывавших в Калмыкию из других губерний России крестьян, промышленных людей поддерживалась правительством путем создания благоприятных условий для проживания, что нашло отражение в нормативно-правовых актах и в деятельности местной власти. Стабильность во взаимоотношениях с инородцами проявлялась в признании калмыцких традиционных систем управления, их включением в систему управления регионом и в легальном использовании в качестве источника правового регулирования обычного права и отдельных положений древних калмыцких законов.

Апробация работы. Диссертация подготовлена на кафедре теории и истории государства и права юридического факультета Российского государственного социального университета. Основные положения работы были отражены в выступлениях автора на научно-практических конференциях, а также изложены в ряде статей.

ВЫВОД ДИССЕРТАЦИИ

по специальности "Теория и история права и государства; история учений о праве и государстве", Очир-Гаряева, Ирина Калиновна, Москва

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В течение почти столетия (с момента вхождения калмыков в состав России в первое десятилетие XVII века) политика царской власти по отношению к калмыцкому народу была для него в общем благоприятной. Она пожаловала обширную территорию для кочевания в Нижнем Поволжье. Калмыки получили, можно сказать, неограниченные возможности для обмена продуктов своего производства на продукты народного хозяйства России. Калмыцкому народу обеспечивалось защита от внешних врагов и полное сохранение во внутренней жизни правил и традиций степного общества.

Вхождение Калмыкии в состав России отвечало интересам калмыков, давало возможность более или менее сохранять устойчивые условия для жизни и хозяйствования. Такая политика российских властей способствовала развитию доверия калмыков к России и вызывала противодействие к неоднократно предпринимавшимся попыткам ханов Джунгарии склонить калмыцких вождей вернуться на территорию Джунгарии, оставленную ими в конце XVI- начале XVII вв.

На территории России калмыки сохранили свое ханство, которое к середине XVIII века находилось в кризисном состоянии. Царское правительство стремилось ослабить институты национальной власти в ханстве. В 1741 г. был введен институт царского наместника ханства, что не могло не привести к некоторому обострению отношений между калмыцкой знатью и царской администрацией. Последовавшее в 1758 г. утверждение калмыцкого правителя в статусе хана не способствовало политической стабилизации в данном регионе.

К началу 60-х годов XVIII в. Калмыцкое ханство вошло в единую систему общегосударственного управления России, но сохраняло, тем не менее, определенный свой правовой статус и самостоятельность. XVIII в. знаменуется, значительным усилением централизации всех звеньев государственного аппарата Российской империи. Образование многонационального Российского государства сопровождалось постепенным формированием местного чиновничества. При господствующем положении в региональном управлении русской администрации необходимость в тесном взаимодействии с коренным населением обуславливала привлечение к управлению местной феодальной знати.

Российские власти проявляли определенную гибкость в своей административной политике в национальных регионах страны. При этом акцент делался не столько на военную силу, а сколько преимущественно на правовое регулирование местной системы управления. Особое значение это имело в регионах с многонациональным составом населения.

Как правило, самодержавие не очень заботилось о совпадении административно-территориального устройства окраин с реальной картиной расселения коренных народов. Поэтому нередко части одного и того же этноса оказывались в разных губерниях, уездах, волостях. Несоответствие между национальным и территориальным строем объективно укрепляло государственное единство, но создавало и определенную почву для недовольства местных народов. Эта политика и изменения в соответствии с ней коснулись и Калмыкии.

Управление Калмыцким ханством подпадало под все более жесткий контроль российский властей. Реорганизация Зарго, поощрения перехода калмыков в православие, вмешательство царской администрации в выборы ханов и наместников - все это свидетельствовало о стремлении самодержавия ослабить значение калмыцких ханов, превратить степную знать в правительственных чиновников. В этих условиях в среде калмыцкой знати возникла идея об откочевки из пределов России.

Уход наместника Убаши в 1771 г. с частью подвластного ему народа был для российских властей неожиданным и неприятным явлением. Губернская астраханская администрация не ожидала такого поворота событий. Сознавая необходимость принятия незамедлительных мер против дальнейшей откочевки калмыков, царское правительство ввело на территории кочевий прямое губернское правление. Астраханский губернатор становился не просто посредником во взаимоотношениях российских властей с калмыцким народом, а непосредственно ответственным лицом по надзору и управлению данными инородцами. Назначение «главным над калмыцкими владельцами» выходца из калмыцкой знати и полностью сросшегося с русской царской аристократией князя А.Ф. Дондукова не только не способствовало установлению удовлетворительных отношений губернской администрации с калмыцким народом, но и вызвало недовольство среди степной знати.

Имевшее место, некоторое промедление царского правительства в вопросе определения статуса оставшихся калмыков в составе России объяснимо тем, что власти еще имели надежды на возвращение наместника Убаши с его подвластными на территорию России. Но им не дано было свершиться.

Рескрипт Екатерины II от 19 октября 1771 г. свидетельствовал об изменении правовой политики российского государства по отношению к калмыкам. Цель такой политики состояла в приведении кочевников «. в несумненное для России и полезное ей состояние »,' т.е. четко определенный, прежде всего в правовом отношении, статус калмыцких территорий во избежание любых сепаратистских проявлений. Изменилось правовое положение Астраханского губернатора: он становится доверенным лицом императрицы и надежным защитником государственных интересов в степях Нижней Волги. Именно к нему, минуя многие центральные органы управления, Екатерина II станет обращаться с рескриптами. Это - начало зарождения принципа единоличного управления отраслями направлений деятельности Российского государства.

Основной целью российского правительства после ухода наместника Убаши с частью подвластного ему народа стало овладение ситуацией в калмыцких кочевьях, которое стало осуществляться Астраханским губернатором и Экспедицией калмыцких дел. Созданная специальная часть канцелярии Астраханского губернатора - Экспедиция калмыцких дел и учрежденный 1772 г. при ней суд Зарго не были самостоятельными структурами ни центрального, ни губернского аппарата. Изначально подведомственная губернатору «Экспедиция» должна была принять срочные меры к успокоению и возможно приемлемому калмыками устройству оставшихся калмыков. И с этими задачами она справилась. Во-первых, «Экспедиция», руководимая губернатором, с совместно задействованными ведомствами, в том числе и воинскими подразделениями, предотвратили возможные попытки оставшихся калмыков последовать за наместником. Во-вторых, были предприняты меры для проведения переписи кочевого населения. В-третьих, оставшиеся подвластные были перераспределены между владельцами, понесшими определенный ущерб из-за откочевки. К тому же были выявлены те владельцы, которые зарекомендовали

1 АВПРИ. Ф. 119. Оп. 2. д. 37. л. 60. себя как лояльно настроенная к российским властям аристократия в ходе событий 1771 г.

Учреждение Кавказского наместничества и включение в его состав Астраханской губернии привело к изменениям в управлении кочующими здесь калмыками. В 1786 г. вместо прежней «Экспедиции» была учреждена войсковая канцелярия, которая была призвана осуществлять управление, а вернее, командование калмыками как иррегулярным войском. Но такое направление в воинском деле не прижилось и в 1788 г. канцелярию переименовали в Калмыцкую канцелярию, изменив тем самым внешне цели и функции ведомства.

Калмыцкая канцелярия являлась более самостоятельным учреждением, нежели Экспедиция. Осуществляя административный контроль над калмыками, канцелярия не просто выполняла приказы губернатора, а рассматривала «предложения» вышестоящих инстанций с целью принятия более приемлемых для подведомственного ей народа решений.

В целом же, перед калмыцкой канцелярией стояли те же задачи что и перед Экспедицией. Во-первых, предпринимались попытки проведения переписи кочевого населения. Из-за постоянных перемещений калмыков, новому ведомству не удалось завершить перепись даже поулусно. Канцелярия осуществила, связанный с этим, контроль за направлением кочевок.

Сменившее в 1797г. данное ведомство Калмыцкое правление также являлось временным учреждением. Тем не менее, оно как самостоятельное ведомство сумело требовательно отнестись к подбору национальных кадров, к делопроизводству и к порядку несения службы своих чиновников. Правлению частично удалось составить поулусные описи калмыков. Это было одним из самых серьезных подступов к решению общей задачи не только по овладению ситуацией в кочевьях, а и по установлению всеобъемлющего контроля над ними.

На рубеже XVIII-XIX вв. царские власти, ввиду неудачной попытки по скорейшему вовлечению калмыков в общегосударственную систему управления и связанных с этим антироссийских настроений в кочевьях, были вынуждены вернуться к институту наместничества.

Власть наместника Чучея Тундутова (1800-1803 гг.) существенно ограничилась в сравнении с его предшественниками -калмыцкими ханами и наместниками ханства. Ни одного более или менее ответственного шага Тундутов не мог предпринять без участия и одобрения российских чиновников.

Назначение Чучея Тундутова наместником не дало ожидаемых царским правительством результатов. Причины неудачного восстановления наместничества следует, по нашему мнению, искать не только во взаимоотношениях российских властей с кочевым народом, но и в обстановке, сложившейся внутри самого калмыцкого общества. Одни причины, думается представлены тем, что стремясь, во что бы-то ни стало ввести кочевой народ в систему государственного управления правительство России не имело четкой национальной политики по отношению к калмыкам. Этим объясняются как ограничения, так и тактические уступки национальной власти в лице наместника и Зарго, вводившие в крайнее заблуждение политические группировки калмыцкой знати.

Другие причины кроются в противоречивом состоянии калмыцкого общества: обострившихся взаимоотношений из-за политических, в основном разногласий дербетов и торгоутов, отсутствия единства среди самих дербетов. Кроме того, нередко решающую роль играла личность наместника Тундутова, который не пользовался достаточным авторитетом среди калмыцких владельцев.

Нойоны не признавали его власти над собой, не подчинялись его распоряжениям. Сам Тундутов за годы наместничества не сумел склонить на свою сторону не только представителей калмыцкой знати, но также и установить отношений доверия и сотрудничества с главным приставом Н.И. Страховым.

В результате сложившейся взаимной неприязни в вышестоящие органы неоднократно поступали жалобы как с одной стороны, так и с другой. В силу этого, наместник не мог эффективно проводить политику России в кочевьях. Все это явилось причиной упразднения наместнической формы правления в калмыцких кочевьях.

После временного восстановления наместничества калмыцкие кочевья подверглись переустройству в соответствии с основными принципами проведенной реформы управления народами Сибири и инородцами. В результате чего Калмыкия влилась в единую систему административно-территориального устройства страны на правах особой области. Учитывая национальные особенности Калмыкии и единые цели российской реформы (централизация управления), Правила 1825 года установили ее правовое положение, определили основы взаимоотношений Калмыкии с органами государственного управления России, Астраханской губернии и Кавказской области.

Правила 1825 года заложили наряду с обычно действовавшим законодательством основы новой правовой системы Калмыкии -гражданское право, уголовное право и процесс, а также установили систему судебных органов.

Положение, введенное в действие с 1 января 1835 г., следует рассматривать и оценивать как своеобразный закон, поскольку в нем был заключен материал, относящийся ко многим отраслям права (кроме административного, широко представлено гражданское право: собственности, наследования и т.д., значительное внимание уделено уголовному и процессуальному).

В Положении прежде всего была определена правовая основа Калмыкии - как составной части Российского государства, поэтому организация управления исходила из общих и местных интересов, система областного и местного управления складывалась и формировалась как часть единого государственного механизма России, но с учетом национальных особенностей. В связи с этим в Положении детально регламентировался порядок взаимоотношений органов областного управления и должностных лиц с российскими государственными учреждениями.

С принятием этого документа принципиально изменилось положение социальных групп населения калмыцкого общества: они в правовом отношении были приравнены (приблизились) к соответствующим социальным группам населения Российского государства. Если анализировать это Положение с вышеназванных позиций, то в развитии Калмыкии, ее статуса был сделан следующий шаг в процессе вхождения Калмыкии в общее развитие Российского государства.

Таким образом, Положение 1834 г. закрепило основные черты политического и общественного строя Калмыкии, оказавшиеся достаточно стабильными. Принятые в последующем нормативные документы в основном его дополняли и развивали, но большей частью внося изменения в организацию управления.

Первое такое изменение произошло в 183 8 г. в связи с образованием 26 декабря 1837 г. Министерства государственных имуществ в систему которого и была передана Калмыкия. Это министерство управляло государственными крестьянами, государственными имуществами, а также осуществляло «попечительство» об усовершенствованиях в области сельского хозяйства (внедрение среди государственных крестьян новых методов обработки земли, распространение агрономии, новых культур, открытие для государственных крестьян школ, больниц и т.п.).

Кочевая жизнь калмыков не способствовала официально провозглашавшемуся «благосостоянию народа». Закрепленные в новом документе, меры, предусматривавшие переход на оседлый образ жизни кочевников вызывали сомнения у чиновников, ибо «едва ли» будут скоры по результативности. Инспекторы справедливо предполагали длительный процесс перехода к оседлости.

Специально созданная комиссия по Калмыкии во главе с сенатором Гагариным определила основные направления преобразований в Калмыцкой степи. По его мнению, «. прежде чем положительно сказать следует ли утвердить предполагаемое изменение в управление калмыками, как особенным народом, или слить оное с общим государственным управлением, следует наперед разрешить два вопроса: первое, польза калмыцкого народа не требует ли, чтобы все усилия Правительства употреблены были для доведения его к оседлой жизни и вторая, польза государства не требует ли того, чтобы сначала лежащие в степях калмыцких дороги были заселены, а потом постепенно и остальные, способные к заселению земли?»1

По результатам работы комиссии Гагарина главный попечитель калмыцкого народа предлагал принудить кочевников к оседлому образу жизни. Во-первых, не разрешать кочевать всем одновременно, а отправлять со скотом пастухов; во-вторых, назначить поселения калмыков «по дорогам, пролегающим через степь.», что оказало бы важную общественную пользу, «а при нежелании калмыков водвориться, полезно было бы допущение по дорогам заселения крестьян с платежом поземельных денег в пользу улусов, чтобы не лишить их права на землю».1

В 1847 г. было принято новое «Положение», направленность которого свидетельствует об осуществлении мер по развитию «попечительства» по усовершенствованию жизни и быта калмыков, уточнению правового положения социальных групп населения, чтобы ускорить их вхождение в социальную структуру российского общества. Особое «попечительство» было подчинено внедрению усовершенствованных методов хозяйствования, развитию новых отраслей хозяйства, земледелия, культуры, образования. Но все эти намечавшиеся мероприятия проводились не за счет казны, а за счет самих калмыков (создание фонда общественного капитала, налоги и различные повинности) и были рассчитаны на «благожелательное попечительство» отдельных частных лиц о калмыках, на увеличение доходов от экономики народа, на дальнейшее формирование опоры царизма из числа местной феодальной верхушки и преодоление национальных особенностей в составе населения России.

Сама система «попечительства» в отношении калмыков превратилась в строгую государственную опеку через центральные и местные (губернские) государственные органы, законодательство, религию, путем бюрократизации и монополизации управления и контроля, регламентации всей сферы жизни калмыков.

В дальнейшем развитии калмыков в России положительную роль сыграла советская власть (но не без, к сожалению, и существенного ущемления прав калмыков в годы Великой Отечественной войны), которая в ноябре 1920 г. образовала Калмыцкую автономную область, в 1936 г. преобразованную в Калмыцкую Автономную Социалистическую Республику в составе

РСФСР. На современном этапе Калмыцкая Республика (Республика Калмыкия - Хальмг Тангч) - это субъект Российской Федерации.

Народы Калмыкии единодушны в отношении нахождения республики в составе Российской Федерации в качестве полноправного ее субъекта. Это отвечает социально-экономическим и политическим реалиям и историческому опыту. Удовлетворение приоритетов национального самоопределения надо обеспечивать через защиту и сохранение национальной самобытности, развитие национальной культуры и политическое представительство в органах власти и местного самоуправления.

БИБЛИОГРАФИЯ ДИССЕРТАЦИИ

«Введение Калмыкии в систему государственного управления России: историко-правовые аспекты»

1. Архивные источники

2. Архив внешней политики Российской империи историко-дипломатического управления Министерства иностранных дел Российской Федерации. (АВПРИ) Ф.119 (1720-1781) Калмыцкие дела, оп.1 д. 1.

3. АВПРИ. оп. 2, д. 2. (1732-1773 гг.)

4. АВПРИ. оп. 2, д. 3.(1742-1779 гг.)

5. АВПРИ. оп. 2, д. 12.(1762-1773 гг.)

6. АВПРИ. оп. 2, д. 13.(1762-1773 гг.)

7. АВПРИ. оп. 2, д. 14. (1762-1774 гг.)

8. АВПРИ. оп. 2, д. 15.(1762-1801 гг.)

9. АВПРИ. оп. 2, д. 16.(1762-1803 гг.)

10. АВПРИ. оп. 2, д. 21. (1763-1777 гг.)

11. АВПРИ. оп. 2, д. 32. (1769-1774 гг.)

12. АВПРИ. оп. 2, д. 33. (1769-1776 гг.)

13. АВПРИ. оп. 2, д. 37. (1771-1773 гг.)

14. АВПРИ. оп. 3, д. 1.(1770-1791 гг.)

15. АВПРИ. оп. 3, д. 2.(1797 г.)

16. АВПРИ. оп.З, д. 3.(1777 г.)

17. Национальный архив Республики

18. Главный пристав», on. 1, д. 14, Переписка с государственной Коллегией иностранных дел о награждении главного пристава калмыцкого народа Страхова серебряной медалью, указы Правительствующего Сената, присланные к сведению. (15.10-24.11.1802 г.)

19. НАРК, Ф.1., оп.1, д. 22. Материалы о смерти наместника калмыцкого народа Чучея Тундутова. Сведения о калмыцком суде Зарго, представленные Астраханским губернатором князю П.Д.Цицианову. (04.05.1803-01.04.1806 гг.)

20. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 23 Дело об увольнении приставов Павловского и Михайлова и о назначении на их места титулярного советника Петрулина и Санджи-Убуши. (15.05-30.07.1803 г.)

21. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 24. Дело по ходатайству зайсанга Багацохуровского улуса Арши об усыновлении зайсанга Пашты сына Онкара и о передаче ему аймака и имения. (17.05.1803-23.07.1806 гг.)

22. НАРК. Ф. 1, оп.1, д. 29. Наставления, данные улусным приставам для руководства при исполнении службы и другие. (27.10.1802-14.01.1804 гг.)

23. НАРК. Ф. 1, оп.1, д. 30. Дело по письму владельца Эрдени Тайши Тундутова о притеснениях пристава Астрахани Лепехина чинимых калмыкам. (11.02.1803-12.02.1804 гг.)

24. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 33. Указ Коллегии иностранных дел и другие документы о подчинении главного пристава и Зарго управляющему Астраханской губернией генерал-лейтенанту князю Цицианову. (30.11.180322.03.1804 гг.)

25. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 37. Материалы об определении коллежского ассесора Горбунова калмыцким приставом в г. Астрахани, о перемещении пристава Калмыцкого базара Назарова и о смене бодогчеев. (31.03.180416.01.1806 гг.)

26. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 41. Дело по предписанию Астраханского военного губернатора приставу о возврате калмыкам земель для кочевий на острове Терновка, занятому крестьянами под поселение. (19.05-21.12.1804 г.)

27. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 49. Копия договора о невмешательстве наместника во внутренние дела улусов, заключенного между наместников ханства Чучеем Тундутовым и калмыцкими владельцами 10 августа 1802 г. (17.07-20.12.1804 г.)

28. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 56. Переписка главного пристава с владельцами улусов для сбора последних в Астрахани по вопросу об уточнении кочевий. (15.01-23.03. 1806 г.)

29. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 63. Переписка главного пристава с владельцами улусов о представлении списков калмыцких кибиток, находившихся у них в ведении. (25.11.1806-25.01.1807 гг.)

30. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 64. Указ Коллегии иностранных дел о порядке избрания судей из числа владельцев, сведения о членах Зарго и другие документы, присланные главному приставу для сведения и справок. (25.03.1807-19.08.1810 гг.)

31. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 66. Переписка главного пристава с приставами улусов о наборе 10 полков калмыков для участия в заграничных походах русской армии 1807 г. (Т. 1). (1807 г.)

32. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 79. Дело по предписанию главнокомандующего графа Гудовича о правах судах Зарго разбирать только тяжбу калмыков, а грабеж, воровство, убийство рассматривать в присутственных местах по российским законам. (30.03-07.07.1807 г.)

33. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 100. Дело по предписанию главнокомандующего о пресечении грабежей и других притеснений, производимых калмыками поселянам. (05.02.1809-26.08.1910 гг.)

34. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 159. Дело по ходатайству членов калмыцкого суда Зарго Астраханскому гражданскому губернатору о восстановлении прежних прав суда и о размежевании земель. (08.04.1818-13.01.1820 гг.)

35. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 163. Дело по жалобе калмыков на главного пристава, подворного советника Смолина и об удалении его с должности. (21.05.1819-09.10.1822 гг.)

36. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 168. Материалы об определении и увольнении частных калмыцких приставов, о переводе служащих следующие чины и другие документы по текущим вопросам. (05.07.1820-06.11.1823 гг.)

37. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 179. Дело о незаконном владении аймаком в 300 кибиток женою умершего зайсанга Ончика Улюджею и о передаче аймака законному владельцу Церен Убуши. (07.11.1821 -11.10.1826 гг.)

38. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 182. Дело о созыве владельцев, лам, членов суда Зарго для дополнения и исправления статей Уложения 1640 г. (29.12.182128.04.1823 гг.)

39. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 252. Ведомости передачи дел приставом Семеновым Шишкову и Полоницкому, а также материалы о перемещении приставов из одного улуса в другой . (01.06.1826-18.10.1827 гг.)

40. НАРК. Ф. 1, on. 1, д. 294. Дело об определении губернского секретаря Рублева частным приставам Мочагов, о составлении для него инструкций для управления улусом и наряде казаков к нему в улус для службы. (15.09.182813.02.1830 гг.)

41. НАРК. Ф. 1, оп. 2, д. 98. Дело по предложению Астраханского военного губернатора об увеличении числа чиновников калмыцкого штата копия Указа правительствующего Сената о новом Положении по управлению калмыцким народом. (05.08.1834-03.01.1835 гг.)

42. НАРК. Ф. 1, оп. 3, д. 1. Рапорты калмыцких владельцев на имя главного пристава калмыцкого народа по разным предметам. (21.11.180627.02.1808 гг.)

43. НАРК. Ф. 2. «Комиссия Калмыцких» дел.оп. 1, д. 1. О содействии Комиссии Калмыцких Дел, с ведомостями о делах у частных приставов в суде Зарго по улусам, о выборе новых судей. (Т. 1). (25.051825 г.)

44. НАРК. Ф. 2, on. 1, д. 15. О составлении штатов для чиновников и канцелярских служителей, находящихся и предполагаемых быть в Калмыцком управлении. (21.12.1826 г.)

45. НАРК. Ф. 2, on. 1, д. 27. По предписанию Астраханского губернатора о составлении списка всех чиновников, составляющих штат Калмыцкого управления. (26.07.1827 г.)

46. НАРК. Ф. 2, on. 1, д. 67. О членах суда Зарго и улусных судьях, утвержденных должностях их по журналам калмыцкой комиссии, о бездействии членов суда Зарго и об их способностях. (29.09.1828г.)

47. НАРК. Ф. 2, on. 1, д. 74. По предложению Астраханского гражданского губернатора о доставлении в Санкт-Петербург 5-ти мальчиков калмыцких для обучения российской грамоте. (16.11-05.12.1828 г.)

48. НАРК. Ф. 2, on. 1, д. 185. По рапорту Мочажного пристава об избрании над калмыками кочующими, кочующими в Мочагах старшин. (08.02.1834г.)

49. НАРК. Ф. 2, on. 1, д. 235. По донесению суда Зарго о решении им дела об утверждении при каждом селении бодагчеев. (06.11 .-24.12.1834 г.)

50. НАРК. Ф. 2, on. 1, д. 276. О зайсанге Эркетеневского улуса Церен Убуши, удаленном от должности правителя с преданием суду уголовной палаты за неповиновение начальству и о выборе в правители вместо него другого. (19.09.1835-24.03.1836 гг.)

51. НАРК. Ф. 2, on. 1а, д. 16. Предписание господина тайного советника, сенатора и кавалера Энгеля, последовавшее в Комиссии Калмыцких Дел. (1827г.)

52. НАРК. Ф. 2, on. 1 а, д. 64. О новом положении в Калмыцком Управлении с 24 ноября 1834 г. высочайше утвержденном. (18.02.1836г.)

53. НАРК. Ф. 2, on. 1 а, д. 82. По прошению Багацохуровского зайсанга Церен Арши об увольнении его от должности улусного судьи. (30.04.1836 г.)

54. НАРК. Ф. 2, оп. 2, д. 4. Переписка с гражданским губернатором о мерах борьбы с грабежом в калмыцких улусах. (26.06.1830 г.)

55. НАРК. Ф. 3. «Совет Астраханского Калмыцкого Управления», on. 1, д. 8. Положение о калмыцком народе от 24 ноября 1834 г. (24.03.1834 г.)

56. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 9. Указы Правительствующего Сената. (09.08.1835-30.05.1836 гг.)

57. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 34. Дело о крещении калмыков Багот-Хара Манджи, Манджи Ювенкеева и других. (25.09.1836-24.11.1837 гг.)

58. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 37. Дело о награждении чиновников Калмыцкого управления и о выдаче им жалования. (20.05.-14.06.1836 гг.)

59. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 67. Дело о командировании секретаря Совета управления калмыцким народом Дробезкина в г. Пятигорск для выяснения численности калмыцкого поселения. (21.06.1837-08.03.1838 гг.)

60. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 73. Дело об учреждении в улусах Калмыцкой степи хотонов.(18.06.1837-04.11.1838 гг.)

61. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 129. Дело об исключении из формулярного служебного списка титулярного советника Зимбилевского за растрату имущества аукционной лавки. (21.06.1839-26.03.1840 гг.)

62. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 130. Дело о самовольной отдаче штабс-капитаном Ленкевичем калмыцких земель в оброк жителям разных поселений Пятигорского уезда. (28.07.1839-27.03.1841 гг.)

63. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 149. Кассовая книга прихода и расхода по Калмыцкому управлению. (1840 г.)

64. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 164. Реестр исходящих бумаг попечителя калмыцкого народа. (07.01-23.12.1840 г.)

65. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 226. Дело об отдаче в арендное содержание участков земель Богоцохуровского улуса. (19.02.1841-25.11.1846 гг.)

66. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 231. Дело об учреждении опекунов на аймак и имение умершего зайсанга Эркетеневского улуса Уту Насун Мазанова, и о ревизии отчетов по опеке. (04.03.1841-08.04.1861 гг.)

67. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 250. Дело по предписанию Совета Калмыцкого управления о составлении именных списков владельцев зайсангов и их родственников. (13.04-06.07.1842 г.)

68. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 283. Формулярные списки о службе чиновников штаба Калмыцкого управления. (1843 г.)

69. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 367. Материалы спора крестьян села Безопасного Ставропольского округа и калмыков за участки земли в Болыпедербетовском улусе между реками Большая и Малая Кегульта и в районе Воровской балки. (19.07.1845-28.03.1850 гг.)

70. НАРК. Ф. 3, on. 1, д. 387. Дело о вынесении Советом строгого выговора Харахусовского улусного суда Санжиеву, и об увольнении письмоводителя Лебедева за невыполнение своих служебных обязанностей. (09.01-29.05.1846 гг.)

71. НАРК. Ф. 3, оп. 2, д. 9. Дело об отводе калмыцкой земли казакам для выпаса скота и сенокошения. (20.02.1840-29.10.1842 гг.)

72. НАРК. Ф. 3, оп. 3, д. 1. Дело о сборе денег на содержание штата калмыцкого управления, казенных недоимок за три года. (27.02.1836-20.12.1841 гг.).

73. НАРК. Ф. 3, оп. 4, д. 1. Отчет СКУ за 1841 г. (1841 г.)

74. НАРК. Ф. 3, оп. 4, д. 2. Дело о земельном споре между государственными крестьянами и калмыками Болыпедербетовского улуса. (29.05.1841-30.10.1842 гг.)

75. НАРК. Ф. 33. «Калмыцкая канцелярия» on. 1, д. 2. Докладной реестр Енотаевской калмыцкой канцелярии. (1788 г.).

76. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 3. Ведомость о взыскании долгов с калмыков. (1788 г.).

77. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 13. Дело об открытии в г. Енотаевске калмыцкой канцелярии. Т.1. (05.04-20.06. 1788 г.).

78. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 15. Дело по предложению правителя Кавказской губернии калмыцкой канцелярии о выдаче билетов майору Тюменю для кочевки с подвластными на луговой стороне Волги. (07.04.1788 г. -29.06.1790 г.).

79. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 16. Материалы следствия по делу ограбления калмыками Дербетовской орды слободы Кавказской (11.04-06.06.1788 г.).

80. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 18. Переписка правителя Кавказской губернии с АКК (Астраханская калмыцкая канцелярия) о правах владельцев Битюкин, Тюменя на находившихся у них калмыков. (11.04-24.05.1788 гг.)

81. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 39. Журнал заседаний калмыцкой канцелярии (09.10.1788-09.10.1790 гг.).

82. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 50. Переписка калмыцкой канцелярии с владельцами улусов о намерении киргиз-кайсаков напасть на г. Гурьев и на калмыков, о мерах по предотвращению. (18.01-29.01.1789 г.).

83. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 55. Переписка калмыцкой канцелярии с правителем кавказского наместничества о наряде калмыков на кардонную службу. (22.06-12.09.1789 г.).

84. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 60. Дело по предложению правителя Кавказской губернии о представлении ему сведений о числе калмыков владельческих и казенных улусов и о местах их кочевий. (22.05-26.05.1789 г.).

85. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 63. Дело о непомерных поборах, производимых зайсангами Багацохуровского улуса с подвластных калмыков, а также об отделении Эркетеневского улуса от вышеназванного. (02.01.1787-14.06.1789 гг.).

86. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 72. Дело по рапорту пристава Дербетова улуса Янковского о неповиновении правителей. (30.04-03.06.1790 г.).

87. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 78. Дело по предложению правителя Кавказской губернии С.А. Брянчанинова о запрещении владельцам и зайсангам отлучаться из улусов без позволения начальства. (30.08-03.09. 1790 г.).

88. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 82. Переписка калмыцкой канцелярии с улусными управлениями о производстве переписи мужского населения в Калмыцкой степи (02.01.1791- 02.05.1793 гг.).

89. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 89. Дело по письму калмыков Харахусово и Бухусова родов о желании принять их православие. (18.01.1791- 14.07.1792 гг.).

90. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 121. Книга записи договоров, заключенных калмыками с разными лицами о найме на работу, для ловли рыбы и другого. (07.05-29.12.1792 г.).

91. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 125. Описи и рапорта о передаче дел по Яндыковскому улусу поручиком Петрулиным толмачу Трухменцову. (21.0703.08.1792 г.).

92. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 178. Дело по предписанию правителя кавказского наместничества о производстве переписи калмыков в казенных улусах. (29.01-06.10.1794 г.).

93. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 182. Журнал заседаний калмыцкой канцелярии. (05.05-13.12.1794 г.).

94. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 192. Дело о перекочевки калмыков на луговую сторону реки Волги. (07.10.1791-18.03.1795 гг.).

95. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 202. Указы, манифесты и другие предложения кавказского наместнического правления, присланные в калмыцкую канцелярию к сведению и руководству. Т.1. (03.01.-04.09.1795 г.).

96. НАРК. Ф. 33, on. 1, д. 242. Рапорта приставов улусов в калмыцкую канцелярию по разным предметам (25.01-23.10.1796 г.).

97. НАРК. Ф. 34. «Астраханское калмыцкое правление» on. 1, д. 25. Дело по указу Астраханского губернского управления о доставлении послужных и формулярных списков чиновников Астраханского калмыцкого правления. (08.04.1798-13.06.1801 гг.).

98. HAPK. Ф. 34, on. 1, д. 40. Предписание генерал-губернатора И.С. Захарова Астраханскому калмыцкому управлению о причислении Болыпедербетовского улуса к Воцску Донскому. (1798 г.).

99. НАРК. Ф. 34, on. 1, д. 72. Дело о вступлении в должность Астраханского военного губернатора Карла Кнорринга и о доставлении ему сведений о чиновниках Астраханского калмыцкого правления, а также сведений о калмыцких улусах. (1799).

100. НАРК. Ф. 34, on. 1, д. 77. Дело о предоставлении Астраханскому губернатору ведомостей решенных и нерешенных дел калмыцкого правления. (1799 г.).

101. НАРК. Ф. 34, on. 1, д. 116. Дело по предписанию военного губернатора Кнорринга о розыске и возвращении 268 калмыцких кибиток зайсангу Мукия, откочевавших из его владения. (23.08-31.10.1800 г.).

102. НАРК. Ф. 35. «Калмыцкая экспедиция при Астраханской губернской канцелярии» on. 1, д. 6. Дело об уходе части калмыков во главе с наместником ханства Убаши в Джунгарию. (17.01-28.02.1771 гг.).

103. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 12. Рапорта, донесения со сведениями о переходе дербетовского владельца Цебека-Убаши на луговую сторону реки Волги и о мерах возвращения случая его последования за Убаши в Джунгарию. (22.03-11.04.1771 г.).

104. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 18. Рапорта. Донесения о калмыках-владельцах, намеревавшихся уйти вслед за своими сородичами, отобрании у них имущества и подвластных им людей. Жалобы царицынских купцов об их ограблении калмыками. (01.09-30.11.1771 г.).

105. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 23. Резолюции астраханского губернатора Н.А. Бекетова по делам калмыцкой экспедиции. (05.01-04.04.1772 г.)

106. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 27. Рапорта, донесения со сведениями о служащих в экспедиции, их службе и жаловании. (09.01-10.07.1772 г.)

107. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 28. Рапорта, переписка о покупке трех дорожных колясок для отправки на них владельцев Асархо, Яндыка и Цебека

108. Убаши в Санкт-Петербург; о расходах экспедиции и другое. (11.09.177220.05.1774 гг.)

109. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 34. Сведения об оставшихся знатных калмыках, их подвластных и скота. (04.1772 г.)

110. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 35. Рапорта, донесения, переписка со сведениями о раздаче калмыков владельцам и зайсангам, оставшимся после ухода наместника Убаши. (17.12.1771-17.04.1772 гг.)

111. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 41. Рапорта, донесения о возвращении в Астраханскую губернию калмыков и татар ушедших с Убаши и задержанных на Сибирской линии. (20.11.1772-19.06.1774 гг.)

112. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 48. О даче губернатору Бекетову отписи на вечное владение пятью семьями калмыков, подаренных ему хошеутовским владельцем Теке. (03.12.1772 г.)

113. ИЗ. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 61. Дело о заключении под стражу в г. Астрахани зайсангов и их подвластных семействами и конфискацией их имущества и скота за попытку уйти в Джунгарию. (11.05-30.09.1773 г.)

114. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 81. Рапорта, донесения, определение об увольнении полковника Кишенского от службы, о приставлении переводчика к владельцу Асархо и т.д. (02.05.1774 г.)

115. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 86. Дело о расследовании участия калмыков в нападении на г. Царицын, будучи под предводительством Е. Пугачева. (24.08.1774 г.)

116. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 120. Рапорта, донесения, переписка о наряде калмыцкого войска в 2000 человек для похода на реку Куму. (05.0126.11.1778 г.)

117. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 137. Предписание, рапорта о переводе калмыцкой команды полковника Дондукова на луговую сторону р. Волги для предотвращения нападения и разбоя со стороны киргиз-кайсаков. (17.0126.07.1780 г.)

118. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 142. Рапорта, протоколы допросов о стычке калмыков с черкесами. Сведения о калмыках, оставшихся на луговой стороне р. Волги. (28.08-31.12.1780 г.)

119. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 155. Переписка о награждении владельца Тюменя золотой медалью за военные действия против кабардинцев.(04.08-18.09.1781 г.)

120. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 173.- Дело о принятии в христианскую веру калмыков владельцев Тюменя и Маши. (28.04.-07.11.1783 г.)

121. НАРК. Ф. 35, on. 1, д. 188. Дело об установлении опеки над имуществом князя Дондукова после смерти его хозяина. (17.04-03.12.1784 г.)

122. НАРК. Ф. 36. «Состоящий при калмыцких делах при астраханском губернаторе» on. 1, д. 422. Реестр исходящим письмам в бытность при калмыцких делах полковника Кишенского. (1771 г.)

123. НАРК. Ф. 36, on. 1, д. 425. Реестр входящим бумагам, полученным полковником Кишенским. Об уходе калмыков (1771 г.)

124. НАРК. Ф. 36, on. 1, д. 430. Об уходе калмыков из пределов России. (1771 г.)

125. НАРК. Ф. 36, on. 1, д. 432. Реестр получаемым указам, ордерам и письмам в бытность при калмыцких делах полковника Кишенского. Рескрипты Екатерины II астраханскому губернатору Н.А. Бекетову по калмыцким делам. (1771 г.)

126. НАРК. Ф. 36, on. 1, д. 435. Донесения, рапорты и письма об уходе калмыков и решения спорных дел. (1771 г.)

127. НАРК. Ф. 42. «Ламайское духовное правление» on. 1, д. 1. -Материалы об открытии ламайского духовного правления, в выборах, его составе и привидения членов правления к присяге. (27.10-28.10.1836 г.)

128. НАРК. Ф. 42, on. 1, д. 2. Материалы по запросу Совета калмыцкого правления о числе хурулов и состоящих при них штатных духовных лиц. (28.10-08.12.1836 г.)

129. Голстунский .К.Ф. Монголо-ойратские законы 1640 года, дополнительные указы Галдан-хун-тайджия и законы, составленные для волжских калмыков при калмыцком хане Дондук-Даши. СПб., 1880

130. Дылыков С.Д. Их цааз ( «Великое уложение»). Памятник монгольского феодального права 17 в. М., 1981.

131. Калмыцкие историко-литературные памятники в русском переводе. Элиста.: Калм. книжное изд.- во, 1969.

132. Леонтович .Ф.И. Древний монголо-калмыцкий или ойратский устав взысканий. (Цааджин-Бичик). Одесса, 1879.

133. Позднеев A.M. Памятники исторической литературы астраханских калмыков в подлинном калмыцком тексте. СПб., 1885.

134. Полное собрание Законов Российской империи.

135. ПСЗ. I отд. Т. 21. (1781-1783) № 15813 О переводе Дербетовых калмыков на Крымскую степь и о переселении Ставропольских калмыков в Екатеринославское наместничество. СПб., 1830. - С. 993.

136. ПСЗ. II отд. Т. 22. (1784-1788) № 16194, п. 22 Распоряжение об устройстве калмыков в области Астраханской. СПб., 1830. - С. 388-391.

137. Т. 22. (1784-1788) № 16239, п. 8 О суммах, потребных для поселения ставропольских калмыков в Екатеринославском наместничестве. СПб., 1830. -С. 439.

138. Т. 22. (1784-1788) № 16355 О поселении калмыков, в Кавказской губернии пребывающих. СПб., 1830. - С. 557.

139. Т. 22. (1784-1788) № 16387 О причислении калмыцких Дербетовых улусов в казенное ведомство. СПб., 1830. - С. 583.

140. Т. 22. (1784-1788) № 16703 О поселении калмыков в России на удобных местах. СПб., 1830. - С. 1099.

141. ПСЗ. I отд. Т. 23. (1789-1796) № 16810, п.З и 4. Распоряжения касательно причисления калмыков к Донскому войску и о высылке надлежащего их числа для содержания кордона против киргизцев. СПб., 1830. -С. 85.

142. Т. 23. (1789-1796) № 16937 О поселении Волжских калмыков в Колыванской губернии. СПб., 1830. - С. 206-207.

143. Т. 23. (1789-1796) № 17118, п. 3. О переводе калмыков с нагорной стороны Волги на луговую. СПб., 1830. - С. 424.

144. ПСЗ. II отд. Т. 25. (1798-1799) № 18513. Об учреждении оспенного дома для кочующих в Астраханской губернии калмыков. СПб. 1830. -С. 233236.

145. Т. 25.(1798-1799) № 18860. Об уничтожении в калмыцкой большого Дербета Орде особого от войска Донского Сыскного начальства и об учреждении вместо онаго особого Правления. СПб. 1830. - С. 568.

146. Т. 25. (1798-1799) № 19196. О сборе ясака с калмыков, кочующих за Бийской линией и о разбирательстве их просьб, по прежним обычаям, комендантам Бийской крепости. СПб. 1830. - С. 893.

147. ПСЗ. II отд. Т. 26. (1800-1801) № 19511. Привилегии, данные депутатам Калмыцкой Орды большого Дербета. СПб. 1830. - С. 259.

148. Т. 26. (1800-1801) № 19536. Об определении коллежского советника Макарова к управлению делами калмыков и других азиатских народов. СПб. 1830.-С. 280.

149. Т. 26. (1800-1801) № 19575. Об отводе калмыкам большого и малого Дербета всех земель от Царицына по рекам: Волге, Сарпе, Салу, Манычу, Куме и взморью. СПб. 1830. - С. 322.

150. Т. 26.(1800-1801) № 19599. -О восстановлении на прежнем основании Совета, именуемого Зарго для судебного разбирательства калмыков. СПб. 1830.-С. 340-341.

151. Т. 26. (1800-1801) № 19600. О свободном отправлении всех духовных обрядов калмыков. СПб. 1830. - С. 341.

152. Т. 26. (1800-1801) № 19921. Об уничтожении калмыцкого правления в городе Астрахани. СПб. 1830. - С. 701.

153. Т. 26. (1800-1801) № 20037. Об утверждении прав и преимуществ Калмыцкому народу присвоенных и об определении при нем особого Главного Пристава. СПб. 1830. - С. 808-809.

154. ПСЗ. II отд. Т. 27. (1802-1803) № 20180. О жаловании Главному Приставу при калмыцком народе и находящимся при нем чиновникам. СПб. 1830.-С. 73-74.

155. Т. 27. (1802-1803) № 20248. Об удовлетворении калмыков землями и порядке разбирательства по делам между калмыками и другими российскими подданными. СПб. 1830.-С. 126.

156. Т. 27. (1802-1803) № 20249. О запрещении продажи вина в калмыцких улусах, кроме ставок, от калмыцких владельцев учреждаемых. СПб. 1830.-С. 126-127.

157. Т. 27. (1802-1803) № 20718. О переводе Чугуевских и Доломановских калмыков, в Мариупольском уезде кочующих калмыков для кочевья на земли войска Донского, и об увольнении их от казенных податей и рекрутской повинности. СПб. 1830. - С. 547.

158. Т. 27. (1802-1803) № 20778. Об отводе земель калмыкам, кочующим в Астраханской и Саратовской губерниях. СПб. 1830. - С. 635-636.

159. Т. 27. (1802-1803) № 20991. Об утверждении торгоутовского владельца Санджи-Убаши и потомков его в звании родовых владельцев Яндыкова улуса. СПб. 1830. - С. 934.

160. Т. 27. (1802-1803) № 21011. О подчинении Главного Пристава при калмыцком народе и Суда их Зарго Астраханскому Военному Губернатору. СПб. 1830.-С. 955.

161. Т. 27. (1802-1803) № 21025. Об устройстве Ставропольского Калмыцкого Войска. СПб. 1830. - С. 968-975.

162. ПСЗ. I отд. Т. 29. (1806-1807) № 22135. О назначении земель калмыкам и другим кочующим народам в губерниях Астраханской и Кавказской. СПб. 1830. - С. 283-309.

163. Т. 29. (1806-1807) № 22553. О сумме, определенной на жалование чиновникам калмыцкого Суда Зарго. СПб. 1830. - С. 1218.

164. ПСЗ. I отд. Т. 31. (1810-1811) № 22582. О сформировании двух калмыцких полков. СПб. 1830. - С. 607-608.

165. ПСЗ. I отд. Т. 33. (1815-1816) № 26196. О подчинении Главного при калмыках Пристава Астраханскому Гражданскому Губернатору. СПб. 1830.-С. 555-556.

166. Т. 33. (1815-1816) № 26448. О не взимании шести процентных пошлин при совершении записей на вымениваемых по Сибирской линии калмыков. СПб. 1830.-С. 1038.

167. ПСЗ. I отд. Т. 36. (1819) № 27782. О калмыках, вымениваемых у киргизцев. СПб. 1830.-С.154-157.

168. ПСЗ. I отд. Т. 40. (1825) № 30290. Правила для управления калмыцкого народа. СПб. 1830. - С. 155-161.

169. ПСЗ. II отд. Т. 10. Прибавл. к 9 т. (1835) № 7560 а. Положение об управлении калмыцким народом, распубликованное 28 декабря 1835. СПб. 1830.-С. 18-40.

170. ПСЗ. I отд. Т. 22. (1847) № 21144. Положение об управлении калмыцким народом, распубликованное 23 апреля 1847. СПб. 1830. - С. 349372.

171. Указ Президента Российской Федерации от 14 января 2006 года « О праздновании 400-летия добровольного вхождения калмыцкого народа в состав Российского государства» // Новые законы и нормативные акты. 2006. - № 7. -С. 132.

172. Халха Джирум. Памятник монгольского феодального права XVIII в. Сводный текст и перевод Ц.Ж.Жамцарано. Подготовка текста к изданию, редакция перевода, введение и примечания С.Д. Дылыкова. М., 1965.1. Литература

173. Авляев Г.О. Происхождение калмыцкого народа (середина IX первая четверть XVIII вв.). Элиста, 1994.

174. Аксенов И.Ч. Становление и развитие калмыцкой государственности и права в XVII-XIX вв.: Автореф. дис. канд. юрид. наук. Ставрополь, 2004.

175. Алиев Б.Г. Союзы сельских общин Дагестана в XVIII первой половине XIX вв. Л.; 1990.

176. Бакаева Э.П. Буддизм в Калыкии: историко-этнографические очерки. Элиста, 1994.

177. Баснин Н.В. О древнем калмыцком уложении. Очерк старинного судопроизводства у калмыков // Юридический вестник. М., 1876. № 3-5. С. 2330.

178. Батмаев М.М. Калмыки в XVII-XVIII веках. Элиста, 1993.

179. Беликов Т.И. Калмыки в борьбе за независимость нашей Родины. (XVIII начале XIX вв). Элиста.: Калмыцкое книжное издательство, 1965.

180. Беликов Т.И. Участие калмыков в войнах России в XVII, XVIII и в первой четверти XIX вв. Элиста.: Калмыцкое книжное издательство, 1960.

181. Бичурин Н.Я. Историческое обозрение волжских калмыков. // Журнал Министерства внутренних дел. 1833. ч. 8. кн. 3. с 283-303; кн. 4. с. 371-413; кн. 5. с. 36-111; ч. 9. кн.7 с. 279-325; кн. 8. с. 381-448.

182. И. Бичурин Н.Я. Историческое обозрение ойратов или калмыков с XV в. до настоящего времени. Спб., 1834.

183. Блиева З.М. Административное и судебное устройство на Северном Кавказе в конце XVIII- первой трети XIX вв. JL; 1984.

184. Боваев Б.З. Калмыцкий народ в русской дореволюционной историографии. // Добровольное вхождение калмыцкого народа в состав России. Элиста, 1985. с. 65-73.

185. Большая Советская Энциклопедия. Т. 21.

186. Броневский В. Описание Донской земли, нравов и обычаев ее жителей. 4.IIL, СПб., 1834.

187. Бюллер Ф. А. Инородцы в Астраханской губернии. Отечественные записки: СПб., 1846, Т. 47, № 7; Т. 47, № 8, отд. 2; Т. 48, № 10; Т. 49, №11.

188. Георги И.Г. Описание всех обитающих в Российском государстве народов. Ч. IV. СПб., 1799.

189. Градовский А.Д. Собрание сочинений. М., 1899. - Т.VIII.; Собрание сочинений. Т. VIII. СПб, 1901.

190. Гумилев JI.H. Древняя Русь и Великая Степь. М, 1989.

191. Гурий (Степанов) Очерки по истории распространения христианства среди монгольских племен. Т. 1,4. 1. Казань, 1915.

192. Дуброва Я. П. Быт калмыков Ставропольской губернии до издания закона 15 марта 1892года. Казань, 1898.

193. Еремин Е.В. Становление федеративных отношений в России: проблемы, основные направления: Дис. док. истор. наук . -М, 1999.

194. Ерошкин Н.П. История государственных учреждений дореволюционной России. М, 1983.

195. Златкин И.Я. История Джунгарского ханства. 1635-1758. М, 1983.

196. Илюмжинов К.Н, Максимов К.Н. Калмыкия на рубеже веков. М.; 1997.

197. Ислам. Общество. Культура. Омск. 1994.

198. История Дальнего Востока СССР с древнейших времен до наших дней. М.; 1989.

199. История народов Северного Кавказа (конец XVIII в. 1917 г.). М.;1988.

200. История Узбекской ССР. Ташкент, 1956. Т. 1. Кн. 2.

201. Карагодин А.И. Крестьянское освоение Астраханского края в первой половине XIX в. // Материалы по истории сельского хозяйства и крестьянства СССР. СПб. № 9. М. 1980. С. 131-148.

202. Карагодин А.И. Н.Н. Пальмов об оседлости приволжских калмыков первой половины XIX в. // КНИИЯМИ, Вестник института. № 15. Элиста 1974. С 29-40.

203. Карагодин А.И. Развитие земледелия у приволжских калмыков в первой половине XIX в. // Общественный строй и социально-политическое развитие дореволюционной Калмыкии. Элиста. 1983. С. 101-121.

204. Карагодин А.И. Хозяйство и общественно-политический строй приволжских калмыков в последней трети XVIII -первой половине XIX вв. Запорожье, 1928.

205. Кичиков M.JI. Исторические корни дружбы русского и калмыцкого народов. Образование Калмыцкого государства в составе России. Элиста, 1966.

206. Лазаревский Н.И. Лекции по русскому государственному праву. СПб., 1910. Т.П.

207. Леонтович Ф.И. К истории права русских инородцев. Калмыцкое право. Ч. 1. Одесса, 1880.

208. Максимов К.Н. История национальной государственности Калмыкии. М.,2000.

209. Макшеев А.И. Военно-статистическое обозрение Российской империи. СПб., 1867.

210. Маркова И.Б. Управление Сибирью в 20-60-х гг. XIX в. Новосибирск, 1985.

211. Мильман А. Политический строй Азербайджана в XIX- начале XX вв. Баку, 1966.

212. Минкин Г.З. Об общественном строе Калмыкии и колониальной политике царизма. Элиста. 1968.; Его же О феодализме у калмыков. // «Революционный Восток», 1933, № 1 (17). С. 123-137

213. Миропиев М.А. О положении русских инородцев. СПб. 1901.

214. Национальные окраины Российской империи: Становление и развитие системы управления. М., 1998.

215. Нефедьев Н.А. Подробные сведения о волжских калмыках, собранные на месте. СПб.

216. Новолетов М.Г. Калмыки. Исторический очерк. СПб., 1884.

217. Очерки истории Калмыцкой АССР. Дооктябрьский период. М.: Наука, 1967.

218. Пальмов Н.Н. Очерк истории калмыцкого народа за время его пребывания в пределах России.; Его же. Этюды по истории приволжских калмыков. 4.5. Астрахань, 1932.

219. Пахомов В.Г. Идеи федерализма в истории политико-правовой мысли России.-М., 2003.

220. Прозрителев Н.Г. Военное прошлое наших калмыков. Ставрополь. 1912.

221. Страхов Н.И. Нынешнее состояние калмыцкого народа. СПб., 1810.

222. Фирсов Н. Инородческое население прежнего Казанского царства в новой России до 1762 г. и колонизация Закамских земель в это время. Казань, 1863.

223. Цамутали А.Н. Борьба течений в русской историографии во второй половине XIX в. М.; 1977

224. Чонов Е. Калмыки в русской армии 17,18 вв. и 1812г. Пятигорск, 1992.

225. Чужгинов А.А. О некоторых историографических проблемах истории Калмыкии, (конец 18 первая половина 19 вв.) // Вестник института. Серия 15. Элиста, 1976.

226. Энциклопедический словарь. Изд. Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона. -Т.1. Ярославль.: «Терра» «Тегга», 1990; Энциклопедический словарь. Изд. Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона. Т.50. Ярославль.: «Терра» - «Тегга», 1992.